毕赤酵母新启动子GCW14在细胞表面展示CALB中的应用

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以毕赤酵母内源壁蛋白Gcwl4p为锚定蛋白,分别以新的内源组成型启动子PGCW14与诱导型启动子PAOXI、组成型启动子PGAP和PTEF14种启动子将南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)展示于毕赤酵母细胞表面,通过检测4种重组细胞的CALB酶活比较这4个启动子在毕赤酵母中的转录活性。结果显示,PGCW14的启动子活性与PAOX1相当,最高菌体酶活力分别在发酵48 h和168h时达到694.8 U/g(Dry cell weight)和684.3 U/g(Dry cell weight),以PGCW14为启动子的重组菌产酶周期大大缩短;组成型启动子PGAP和PTEF1的最高菌体酶活分别在发酵24 h和168 h达到266.7 U/g(Dry cell weight)和449.2 U/g(Dry cell weight),可见PGCW14的启动子活力性要高于PGAP和PTEF1。此外,以PGCW14为启动子,利用壁蛋白Gcw14p自身的信号肽代替载体上的α-信号肽使重组菌的菌体酶活力提高了约4%。
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