CAR-bacillus亚单位rRNA基因分子克隆及斑点杂交方法的建立

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用真细菌类亚单位rRNAq,的保守序列片段合成引物.从小鼠来源的CAR-baclllusCBM株的基因组中用PCR方法扩增出其1.5kb大小的基因片段.两端加尾dC,和已加尾dG的pBR322质粒连接.转化入JMJ09菌中,在古有四环素的培养基中姚选克隆经氮苄青霉索筛选后,在LB基渡中大量增殖.经溶菌酶裂解,提取重组质粒.授pstI消化,得到1.5kb大小的插入片段,经HindI.HInfI,EcoT14,HeaI和XhoI测定忠实性后.以此为模板,用非放射地高辛标记试剂盒合成探针.其灵敏性可达1.20,
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