【摘 要】
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目的 克隆中国人阻滞原基因并高效表达。方法 利用高保真聚合酶链反应 (HF -PCR)从胎肝细QSD胞克隆IV型胶原α1链NC1结构域编码序列 ,即阻滞原基因 ,并进行序列分析。将阻
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目的 克隆中国人阻滞原基因并高效表达。方法 利用高保真聚合酶链反应 (HF -PCR)从胎肝细QSD胞克隆IV型胶原α1链NC1结构域编码序列 ,即阻滞原基因 ,并进行序列分析。将阻滞原基因克隆入表达载体pQE - 3 1,转化大肠杆菌M 15 [pREP4]并用IPTG诱导蛋白表达 ,蛋白电泳鉴定重组阻滞原蛋白。 结果 从胎肝细胞克隆的人阻滞原基因长 687bp ,编码 2 2 9个氨基酸 ;大肠杆菌表达的重组阻滞原N -末端与载体编码的组氨酸标签形成融合蛋白 ;SDS -PAGE分析显示 ,经IPTG诱导后可出现 2 8kd的目的蛋白条带 ,最高可占总菌体蛋白的 3 2 %。结论 该法可成功克隆阻滞原基因 ,将有助于肿瘤血管抑制疗法的深入研究
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