目的:建立梯度洗脱-HPLC法测定异烟肼原料及其片剂中有关物质,并对国内外20家企业异烟肼片的有关物质进行分析。方法:资生堂CAPCELL PAK ADME（4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱,流动相为0.05 mol·L^-1磷酸二氢钾溶液（pH 6.0±0.05）-甲醇,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^-1,检测波长为262 nm,柱温为35℃。已知杂质测定采用相对保留时间（RRT）定性,校正因子（f）定量的主成分自身对照法,未知杂质为不加校正因子的自身对照法。结果:异烟肼、6个已知杂质以及其他降解杂质分离度均大于1.5,异烟肼与6个已知杂质呈良好的线性关系,6个已知杂质的平均回收率为92.5%¹10.0%,精密度、重复性、稳定性、专属性均良好。美国山德士片剂中检出1个含量达3.1%的特有杂质,LC-MS初步确定其为异烟肼与乳糖反应产生的乳糖异烟腙。国内大多数企业片剂单个杂质含量在0.5%以下,各杂质总和含量在1.0%以下。结论:梯度洗脱-HPLC方法灵敏,专属性好,可用于异烟肼及其片剂质量一致性评价中有关物质的分析研究。