观察白藜芦醇对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞肥大的作用,并研究其对心肌细胞叉头转录因子O1(FoxO1)/锰超氧化物歧化酶(MnSOD)信号通路的影响。
方法应用细胞培养技术培养新生大鼠心肌细胞,胰酶消化,差数贴壁法体外分离培养大鼠心肌细胞。将心肌细胞分为5组,分别为对照组(不加任何干预因素)、AngⅡ(10–6 mol/L)组(AngⅡ组)、AngⅡ(10–6 mol/L)+白藜芦醇(10 μmol/L)组[AngⅡ+白藜芦醇(10 μmol/L)组]、AngⅡ(10–6 μmol/L)+白藜芦醇(25 μmol/L)组[AngⅡ+白藜芦醇(25 μmol/L)组]和AngⅡ(10–6 μmol/L)+白藜芦醇(50 μmol/L)组[AngⅡ+白藜芦醇(50 μmol/L)组]。3H–亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率(心肌细胞肥大的指标),相差显微镜测量细胞大小(细胞直径),实时定量聚合酶链反应检测A型利钠肽(ANP) mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法检测心肌细胞MnSOD、FoxO1和乙酰化FoxO1蛋白表达水平,免疫共沉淀法检测Sirt1与FoxO1的相互结合水平。
结果AngⅡ组心肌细胞蛋白质合成速率明显大于对照组[(1 971±175)计数·min–1·孔–1比(1 216±136)计数·min–1·孔–1,P<0.05],AngⅡ+白藜芦醇(10 μmol/L)组、AngⅡ+白藜芦醇(25 μmol/L)组和AngⅡ+白藜芦醇(50 μmol/L)组则均明显低于AngⅡ组(P均<0.05),且以AngⅡ+白藜芦醇(25 μmol/L)组最为显著[(1 374±143)计数·min–1·孔–1]。AngⅡ组心肌细胞直径大于对照组[(29.3±3.2) μm比(19.4±1.8) μm,P<0.05],AngⅡ+白藜芦醇(10 μmol/L)组、AngⅡ+白藜芦醇(25 μmol/L)组和AngⅡ+白藜芦醇(50 μmol/L)组则均小于AngⅡ组(P均<0.05),且以AngⅡ+白藜芦醇(25 μmol/L)组最为显著[(20.8±2.1) μm]。AngⅡ组心肌细胞ANP mRNA表达水平高于对照组(4.4±0.4比1.0±0.1,P<0.05),AngⅡ+白藜芦醇(10 μmol/L)组、AngⅡ+白藜芦醇(25 μmol/L)组和AngⅡ+白藜芦醇(50 μmol/L)组则均低于AngⅡ组(P均<0.05),且以AngⅡ+白藜芦醇(25 μmol/L)组最为显著(2.2±0.2)。AngⅡ组心肌细胞MnSOD蛋白表达水平和活性均明显低于对照组(P均<0.05),AngⅡ+白藜芦醇(25 μmol/L)组心肌细胞MnSOD蛋白表达水平和活性则均明显高于AngⅡ组(P均<0.05)。AngⅡ组心肌细胞Sirt1与FoxO1的相互结合水平低于对照组(1.00±0.11比1.63±0.16,P<0.05),而乙酰化FoxO1的表达水平则高于对照组(1.48±0.16比1.00±0.13,P<0.05),而AngⅡ+白藜芦醇(25 μmol/L)组心肌细胞Sirt1与FoxO1的相互结合水平高于AngⅡ组(1.64±0.16, P<0.05),乙酰化FoxO1的表达水平则低于AngⅡ组(0.79±0.07, P<0.05)。
结论白藜芦醇可以抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大,其作用机制可能与激活Sirt1,降低乙酰化FoxO1的表达有关,提示Sirt1可能是治疗心肌细胞肥大的潜在靶点。