论文部分内容阅读
【摘要】 目的：探讨ERCC1和TS蛋白在大肠癌中的表达及其临床意义。方法：采用免疫组化SP法和组织芯片对196例大肠癌组织和50例正常大肠切缘组织进行ERCC1和TS蛋白表达水平检测，分析两者与临床病理特征的关系。其中129例术后患者行FOLFOX4方案化疗，随访3年。结果：在结直肠癌中ERCC1及TS表达均高于正常肠黏膜组织，而与性别、年龄、分化程度、部位无关（P>0.05），TS阳性表达率及两者双阳性表达率均在有淋巴结转移者及TNM Ⅲ期、Ⅳ期患者中明显升高。ERCC1、TS阴性表达者3年DFS均分别高于阳性表达者（P<0.05）。结论：ERCC1和TS蛋白在大肠癌中的阳性表达较高，可能与肿瘤的发生、转移有关。ERCC1和TS蛋白阴性者可从FOLFOX4化疗中获益。
【关键词】 ERCC1蛋白； TS 蛋白； 大肠癌； 免疫组化； 3年DFS
大肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，发病率逐年上升，严重威胁人民健康。大肠癌治疗采用手术、放化疗、分子靶向治疗等相结合的综合治疗，肿瘤复发和转移是影响长期生存的主要因素。目前分子生物技术的发展，为大肠癌的诊断及预后、个体化治疗提供了有力的保障。笔者收集2009年1-12月安阳市肿瘤医院一年间行大肠癌根治术后的196例标本，采用免疫组化及组织芯片技术，检测ERCC1和TS蛋白在大肠癌中的表达，探讨其与肿瘤的发生、发展关系，并对其中129例术后患者应用FOLFOX4方案化疗，进行3年随访，探讨ERCC1和TS蛋白的临床意义。
1 资料与方法
1.1 一般资料 收集安阳市肿瘤医院2009年1-12月手术切除的结直肠癌组织石蜡标本196例，患者术前均未接受放疗和化疗。其中男112例，女84例，年龄28～83岁，平均59.5岁，病理均为腺癌。129例Ⅱ期、Ⅲ期患者应用FOLFOX4方案行术后辅助化疗。其中Ⅱ期患者44例，Ⅲ期患者85例。取50例正常大肠组织作为对照。
1.2 方法
1.2.1 应用免疫组化SP法和组织芯片技术 按照SP检测试剂盒说明书所示步骤进行，组织芯片由上海芯超生物科技有限公司制作。ERCC1鼠抗人单克隆抗体、TS鼠抗人单克隆抗体、SP检测试剂盒及DAB显色液，均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。
1.3 判定标准 ERCC1以胞核及胞浆中出现棕黄色颗粒为阳性染色，TS以胞浆中出现棕黄色颗粒为阳性染色，选取5个高倍视野（400×），每个视野计数200个肿瘤细胞，计数阳性细胞百分比，取其均值。参照Wachters等[1]的方法：阳性细胞数百分率≤10%或不表达，记作阴性，>10%记作阳性。门诊复查、电话随访等，随访3年，记录DFS。
1.4 统计学处理 采用SPSS 13.0软件对所得数据进行统计分析，计数资料采用 字2检验，Fisher精确概率法及Kaplan-Meier法，以P<0.05为差异有统计学意义。
3 讨论
笔者的研究显示ERCC1及TS蛋白在大肠癌中的表达均高于正常大肠组织。在大肠癌组织中ERCC1表达与性别、年龄、分化程度、部位、淋巴结转移、分期无关（P>0.05），而TS蛋白阳性表达与淋巴及转移、肿瘤进展分期明显相关。Yuanming等[5]报道ERCC1在有淋巴结转移的结肠癌患者中的表达率降低，与笔者的研究不太一致。
本研究显示TS蛋白在有淋巴结转移和临床分期为Ⅲ、Ⅳ期患者中阳性表达分别高于无淋巴结转移和临床分期为Ⅰ、Ⅱ期者（P<0.05），提示TS蛋白阳性表达率的升高，与结肠癌变进展、转移有关。
ERCC1、TS、MMR单一指标的检测能否作为判断结肠癌Ⅱ、Ⅲ期患者预后的指标，研究报道不一[6-9]。笔者的研究显示ERCC1和TS共同阳性表达（表4）与结肠癌的淋巴结转移、病理分期有明显相关性，其表达率的升高提示肿瘤的侵袭、转移性增加。Ohrling等[10]报道在Ⅲ期结肠癌患者中联合检测错配修复蛋白（MMR）和TS表达情况相比检测单一指标对5-Fu为基础的化疗方案的敏感预见性更好。联合检测ERCC1蛋白和TS蛋白表达可能对结肠癌术后的FOLFOX辅助化疗更有指导意义，笔者的研究显示：ERCC1和TS蛋白阴性者辅助化疗后的3年DFS分别明显高于ERCC1和TS蛋白阳性者，能从FOLFOX4化疗中获益。Li等[11]报道ERCC1阴性者大肠癌的5年生存率高于阳性者，与笔者的3年DFS随访结果一致。
随着肿瘤分子学的研究深入，结直肠癌的病理生理特点及其预后判断和个体化诊疗，将会有更进一步的发展。
参考文献
[1] Wachters F M，Wong L S M，Timens W，et al.ERCC1，hRad51，and BRCA1 protein expression in relation to tumour response and survival of stage Ⅲ/IV NSCLC patients treated with chemotherapy[J].Lung Cancer，2005，50（2）：211-219.
[2]徐光輝，李玉，叶胜龙，等.结肠癌组织中ERCC1和BRCA1的表达及其与铂类化疗疗效的相关性[J].复旦学报（医学版），2011，38（4）：315-318.
[3]钟琼，李邦华，朱惠东，等.结肠癌组织中ERCC1表达及其意义[J].实用癌症杂志，2009，24（3）：261-264.
[4]程慧敏，刘静，唐采白，等.大肠癌CD133（+）、Musashi-1（+）干细胞与临床病理学因素及MGMT、ERCC1、TS关系的研究[J].徐州医学院学报，2010，30（2）：104-110.
[5] Yuanming L，Lineng Z，Baorong S，et al.BRCA1 and ERCC1 mRNA levels are associated with lymph node metastasis in Chinese patients with colorectal cancer[J].BMC Cancer，2013，13（1）：103. [6] Chen Y，Yi C，Liu L，et al.Thymidylate synthase expression and prognosis in colorectal cancer：a meta-analysis of colorectal cancer survival data[J].Int J Biol Markers，2012，27（3）：203-211.
[7] Ohrling K，Edler D，Hallstrm M，et al.Mismatch repair protein expression is an independent prognostic factor in sporadic colorectal cancer[J].Acta Oncol，2010，49（6）：797-804.
[8] Sarasqueta A F，van Lijnschoten G，Lemmens V E P P，et al.Pharmacogenetics of Oxaliplatin as Adjuvant Treatment in Colon Carcinoma[J].Mol Diagn Ther，2011，15（5）：277-283.
[9] Kaira K，Okumura T，Ohde Y，et al.Prognostic significance of thymidylate synthase expression in the adjuvant chemotherapy after resection for pulmonary metastases from colorectal cancer[J].Anticancer Res，2011，31（9）：2763-2771.
[10] Ohrling K，Karlberg M，Edler D，et al.A Combined Analysis of Mismatch Repair Status and Thymidylate Synthase Expression in Stage Ⅱ and Ⅲ Colon Cancer[J].Clin Colorectal Cancer，2012，12（2）：128-135.
[11] Li P，Fang Y J，Li F，et al.ERCC1，defective mismatch repair status as predictive biomarkers of survival for stage Ⅲ colon cancer patients receiving oxaliplatin-based adjuvant chemotherapy[J].Br J Cancer，2013，108（6）：1238-1244.
（收稿日期：2013-05-13） （本文編辑：欧丽）
【关键词】 ERCC1蛋白； TS 蛋白； 大肠癌； 免疫组化； 3年DFS
大肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，发病率逐年上升，严重威胁人民健康。大肠癌治疗采用手术、放化疗、分子靶向治疗等相结合的综合治疗，肿瘤复发和转移是影响长期生存的主要因素。目前分子生物技术的发展，为大肠癌的诊断及预后、个体化治疗提供了有力的保障。笔者收集2009年1-12月安阳市肿瘤医院一年间行大肠癌根治术后的196例标本，采用免疫组化及组织芯片技术，检测ERCC1和TS蛋白在大肠癌中的表达，探讨其与肿瘤的发生、发展关系，并对其中129例术后患者应用FOLFOX4方案化疗，进行3年随访，探讨ERCC1和TS蛋白的临床意义。
1 资料与方法
1.1 一般资料 收集安阳市肿瘤医院2009年1-12月手术切除的结直肠癌组织石蜡标本196例，患者术前均未接受放疗和化疗。其中男112例，女84例，年龄28～83岁，平均59.5岁，病理均为腺癌。129例Ⅱ期、Ⅲ期患者应用FOLFOX4方案行术后辅助化疗。其中Ⅱ期患者44例，Ⅲ期患者85例。取50例正常大肠组织作为对照。
1.2 方法
1.2.1 应用免疫组化SP法和组织芯片技术 按照SP检测试剂盒说明书所示步骤进行，组织芯片由上海芯超生物科技有限公司制作。ERCC1鼠抗人单克隆抗体、TS鼠抗人单克隆抗体、SP检测试剂盒及DAB显色液，均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。
1.3 判定标准 ERCC1以胞核及胞浆中出现棕黄色颗粒为阳性染色，TS以胞浆中出现棕黄色颗粒为阳性染色，选取5个高倍视野（400×），每个视野计数200个肿瘤细胞，计数阳性细胞百分比，取其均值。参照Wachters等[1]的方法：阳性细胞数百分率≤10%或不表达，记作阴性，>10%记作阳性。门诊复查、电话随访等，随访3年，记录DFS。
1.4 统计学处理 采用SPSS 13.0软件对所得数据进行统计分析，计数资料采用 字2检验，Fisher精确概率法及Kaplan-Meier法，以P<0.05为差异有统计学意义。
3 讨论
笔者的研究显示ERCC1及TS蛋白在大肠癌中的表达均高于正常大肠组织。在大肠癌组织中ERCC1表达与性别、年龄、分化程度、部位、淋巴结转移、分期无关（P>0.05），而TS蛋白阳性表达与淋巴及转移、肿瘤进展分期明显相关。Yuanming等[5]报道ERCC1在有淋巴结转移的结肠癌患者中的表达率降低，与笔者的研究不太一致。
本研究显示TS蛋白在有淋巴结转移和临床分期为Ⅲ、Ⅳ期患者中阳性表达分别高于无淋巴结转移和临床分期为Ⅰ、Ⅱ期者（P<0.05），提示TS蛋白阳性表达率的升高，与结肠癌变进展、转移有关。
ERCC1、TS、MMR单一指标的检测能否作为判断结肠癌Ⅱ、Ⅲ期患者预后的指标，研究报道不一[6-9]。笔者的研究显示ERCC1和TS共同阳性表达（表4）与结肠癌的淋巴结转移、病理分期有明显相关性，其表达率的升高提示肿瘤的侵袭、转移性增加。Ohrling等[10]报道在Ⅲ期结肠癌患者中联合检测错配修复蛋白（MMR）和TS表达情况相比检测单一指标对5-Fu为基础的化疗方案的敏感预见性更好。联合检测ERCC1蛋白和TS蛋白表达可能对结肠癌术后的FOLFOX辅助化疗更有指导意义，笔者的研究显示：ERCC1和TS蛋白阴性者辅助化疗后的3年DFS分别明显高于ERCC1和TS蛋白阳性者，能从FOLFOX4化疗中获益。Li等[11]报道ERCC1阴性者大肠癌的5年生存率高于阳性者，与笔者的3年DFS随访结果一致。
随着肿瘤分子学的研究深入，结直肠癌的病理生理特点及其预后判断和个体化诊疗，将会有更进一步的发展。
参考文献
[1] Wachters F M，Wong L S M，Timens W，et al.ERCC1，hRad51，and BRCA1 protein expression in relation to tumour response and survival of stage Ⅲ/IV NSCLC patients treated with chemotherapy[J].Lung Cancer，2005，50（2）：211-219.
[2]徐光輝，李玉，叶胜龙，等.结肠癌组织中ERCC1和BRCA1的表达及其与铂类化疗疗效的相关性[J].复旦学报（医学版），2011，38（4）：315-318.
[3]钟琼，李邦华，朱惠东，等.结肠癌组织中ERCC1表达及其意义[J].实用癌症杂志，2009，24（3）：261-264.
[4]程慧敏，刘静，唐采白，等.大肠癌CD133（+）、Musashi-1（+）干细胞与临床病理学因素及MGMT、ERCC1、TS关系的研究[J].徐州医学院学报，2010，30（2）：104-110.
[5] Yuanming L，Lineng Z，Baorong S，et al.BRCA1 and ERCC1 mRNA levels are associated with lymph node metastasis in Chinese patients with colorectal cancer[J].BMC Cancer，2013，13（1）：103. [6] Chen Y，Yi C，Liu L，et al.Thymidylate synthase expression and prognosis in colorectal cancer：a meta-analysis of colorectal cancer survival data[J].Int J Biol Markers，2012，27（3）：203-211.
[7] Ohrling K，Edler D，Hallstrm M，et al.Mismatch repair protein expression is an independent prognostic factor in sporadic colorectal cancer[J].Acta Oncol，2010，49（6）：797-804.
[8] Sarasqueta A F，van Lijnschoten G，Lemmens V E P P，et al.Pharmacogenetics of Oxaliplatin as Adjuvant Treatment in Colon Carcinoma[J].Mol Diagn Ther，2011，15（5）：277-283.
[9] Kaira K，Okumura T，Ohde Y，et al.Prognostic significance of thymidylate synthase expression in the adjuvant chemotherapy after resection for pulmonary metastases from colorectal cancer[J].Anticancer Res，2011，31（9）：2763-2771.
[10] Ohrling K，Karlberg M，Edler D，et al.A Combined Analysis of Mismatch Repair Status and Thymidylate Synthase Expression in Stage Ⅱ and Ⅲ Colon Cancer[J].Clin Colorectal Cancer，2012，12（2）：128-135.
[11] Li P，Fang Y J，Li F，et al.ERCC1，defective mismatch repair status as predictive biomarkers of survival for stage Ⅲ colon cancer patients receiving oxaliplatin-based adjuvant chemotherapy[J].Br J Cancer，2013，108（6）：1238-1244.
（收稿日期：2013-05-13） （本文編辑：欧丽）