【摘 要】
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目的:应用分子生物学技术,构建胰腺十二指肠同源框蛋白1(Pdx1)和神经分化因子1(NeuroD1)转录因子真核表达质粒,检测其能否在真核细胞中有效表达并诱导人肝细胞转分化的能力.
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目的:应用分子生物学技术,构建胰腺十二指肠同源框蛋白1(Pdx1)和神经分化因子1(NeuroD1)转录因子真核表达质粒,检测其能否在真核细胞中有效表达并诱导人肝细胞转分化的能力.方法:以人胚胎胰腺组织mRNA为模板经RT-PCR扩增获得Pdxl和NeuroD1基因,分别克隆到真核双表达载体plRES质粒的多克隆位点A(MCSA)和B(MCSB)中,构建pl/Pdxl/NeuroD1真核表达质粒,并转染LO2细胞.用RT-PCR、免疫组化、间接荧光法和Western blotting检测目的基因及NK转录因子相关的Nkx6.1(Nkx6.1)和葡萄糖运载体2(GLUT2)的表达情况.结果:目的基因克隆正确且在真核细胞中有效表达;并可诱导肝细胞表达胰腺B细胞功能相关的Nkx6.1和GLUT2因子.结论:pl/Pdxl/NeuroD1质粒成功构建和在人真核细胞表达,并诱导人肝细胞表达B细胞功能相关的Nkx6.1转录因子和GLUT2,提示Pdxl与NeuroDl可诱导肝细胞向胰腺内分泌细胞分化.
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