目的 构建pSilencer 3.1-细胞周期检测点激酶1(Chk1)小干扰RNA(siRNA)重组载体,观察其对顺铂抑制食管癌EC9706细胞增殖及诱导其凋亡的影响.方法 根据Chk1基因序列,设计合成3条Chk1 siRNA片段,构建3个pSilencer 3.1-Chk1 siRNA重组载体,转染人食管鳞癌EC9706,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测细胞中Chk1 mRNA的表达,Western blot 检测Chk1蛋白的表达,选择抑制Chk1表达最强的pSilencer 3.1-Chk1 siRNA转染EC9706 24 h后,再应用浓度为10 μmol/L的顺铂处理EC9706细胞12 h,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,原位末端转移酶标记(TUNEL)法及流式细胞术检测各组细胞凋亡,同时设顺铂单独处理组和正常对照组.结果 pSilencer 3.1-Chk1 siRNA转染食管癌EC9706细胞,人食管癌EC9706细胞中Chk1 mRNA及蛋白(siRNA1:1.828±0.077,siRNA2:1.801±0.072,siRNA3:1.833±0.079,未处理的EC9706细胞2.793±0.086,对照siRNA组2.724±0.084)的表达均减弱,且差异均有统计学意义(P＜0.05),并增强顺铂对人食管癌EC9706细胞增殖的抑制作用[Chk1 siRNA+顺铂组、顺铂组及正常对照组细胞生长抑制率分别为(24.67±0.54)％、(13.56±0.28)％及(1.93±0.12)％]及对细胞凋亡指数[Chk1 siRNA+顺铂组、顺铂组及正常对照组分别为(11.76±1.02)％、(19.97±1.23)％及(3.76±0.54)％]的诱导作用(P＜0.05).结论 成功构建的pSilencer 3.1-Chk1 siRNA重组载体,其可能通过抑制Chk1基因的表达,增强顺铂抗肿瘤的敏感性。
细胞周期检测点激酶1小干扰RNA对顺铂抑制人食管癌EC9706细胞增殖、诱导其凋亡的影响
【摘 要】
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目的 构建pSilencer 3.1-细胞周期检测点激酶1(Chk1)小干扰RNA(siRNA)重组载体,观察其对顺铂抑制食管癌EC9706细胞增殖及诱导其凋亡的影响.方法 根据Chk1基因序列,设计合成3条Chk1 siRNA片段,构建3个pSilencer 3.1-Chk1 siRNA重组载体,转染人食管鳞癌EC9706,采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测细胞中Chk1
【机 构】
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450052郑州大学第一附属医院肿瘤内科,河南省肿瘤医院病理科,450052郑州大学第一附属医院肿瘤内科,450052郑州大学第一附属医院肿瘤内科,450052郑州大学第一附属医院肿瘤内科
【出 处】
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中华实验外科杂志
【发表日期】
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2013年30期
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