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目的
观察含氢培养基对巨噬细胞RAW264.7极化的影响,并初步探讨巨噬细胞的功能。
方法分别采用常规培养和含氢培养基培养巨噬细胞RAW264.7(M0),予以脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)20 ng/mL和干扰素-γ(interferon gamma,IFN-γ)50 ng/mL诱导M1型极化,白细胞介素-4(interleukin,IL-4)20 ng/mL诱导M2型极化,采用相差显微镜观察细胞形态学变化,CCK-8法检测细胞活力,实时荧光定量PCR(quantitative real-time,qPCR)检测相关炎症基因表达情况,流式细胞仪检测M1型巨噬细胞膜蛋白CD16/32和M2型巨噬细胞膜蛋白CD206比例变化,Western blot检测核转录因子(nuclear factor-kappa B,NF-κB)表达变化,划痕实验检测细胞迁移能力。
结果巨噬细胞予以LPS和IFN-γ诱导后显示M1型极化,表现为轴突细而长;予以IL-4诱导后显示M2型极化,表现为轴突短而小。炎症因子(iNOS、TNF-α、和IL-1β)在M1型巨噬细胞中以及IL-10和YM-1在M2型巨噬细胞中表达显著增加(P<0.05)。氢气对RAW264.7的活力无显著影响。含氢培养基可降低M1型巨噬细胞促炎症因子表达和膜蛋白CD16/32表达下降,核转录因子NF-κB(P65)入核减少,并降低M1型巨噬细胞的迁移能力。但对M2型巨噬细胞的极化及功能无显著影响(P>0.05)。
结论含氢培养基减少M1型巨噬细胞炎症因子表达和膜蛋白CD16/32比例,并降低M1型巨噬细胞迁移能力,可能与核转录因子NF-κB(P65)入核减少有关。