探讨miR-30b对大鼠H9C2心肌细胞凋亡的影响。
方法将大鼠H9C2细胞分为空白对照组、阴性对照组和miR-30b mimics三个组,按照Lipofectamine™2000转染方法转染24 h,RT-PCR检测三个组的miR-30b表达;将H9C2细胞分为阴性对照组、miR-30b mimics组和miR-30b mimics+H2O2组,24 h转染后并采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,以Western bloting法检测各组天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、β-连环蛋白(β-catenin)和c-myc蛋白表达。
结果阴性对照组miR-30b的mRNA表达(1.007±0.062)与空白对照组(1.000±0.059)差异无统计学意义(F=0.200,P=0.849),而miR-30b mimics组miR-30b的mRNA表达(4.212±0.088)高于阴性对照组(F=72.929,P=0.000)和空白对照组(F=74.261,P=0.000)。阴性对照组、miR-30b mimics组和miR-30b mimics+ H2O2组的细胞凋亡率分别为(11.35±0.88)%、(1.22±0.13)%和(5.83±0.41)%,miR-30b mimics组、miR-30b mimics+ H2O2组细胞凋亡率均低于阴性对照组(F=778.088,P=0.000,F=193.976,P=0.000),而miR-30b mimics组细胞凋亡率低于miR-30b mimics+ H2O2组(F=689.257,P=0.000)。miR-30b mimics组和miR-30b mimics+ H2O2组Cleaved caspase3(F=351.384,P=0.000,F=55.762,P=0.000)、β-catenin(F=506.207,P=0.000,F=248.244,P=0.000)和c-myc蛋白(F=456.110,P=0.000,F=115.466,P=0.000)表达均低于阴性对照组,而miR-30b mimics组Cleaved caspase3(F=167.105,P=0.000)、β-catenin(F=221.693,P=0.000)和c-myc(F=127.825,P=0.000)蛋白表达低于miR-30b mimics+H2O2组。
结论过表达miR-30b可降低H9C2心肌细胞凋亡,其机制与下调Wnt信号通路有关。