【摘 要】
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目的利用CRISPR/Cas9系统敲除小鼠水通道蛋白9（AQP-9）基因,构建稳定敲除AQP-9基因的纯合子AQP-9-/-小鼠。方法根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,在Ensembl数据库上找到AQP-9基因序列的外显子区域,综合分析选定AQP-9-202的公共外显子2,前期在其两边设计7个小向导RNA（sgRNA）靶点,选择合适靶点,将AQP-9敲除。用PCR以及基因测序手段检测基因敲除
【机 构】
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北京大学基础医学院人体解剖学教研室
【基金项目】
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国家自然科学基金（81873769）； 北京市自然科学基金（7162098）；
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目的利用CRISPR/Cas9系统敲除小鼠水通道蛋白9（AQP-9）基因,构建稳定敲除AQP-9基因的纯合子AQP-9-/-小鼠。方法根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,在Ensembl数据库上找到AQP-9基因序列的外显子区域,综合分析选定AQP-9-202的公共外显子2,前期在其两边设计7个小向导RNA（sgRNA）靶点,选择合适靶点,将AQP-9敲除。用PCR以及基因测序手段检测基因敲除效果。获得F1代杂合子小鼠后,继而提供10只野生型小鼠（雌雄各5只）进行繁育,以期得到纯合子AQP-9-/-小鼠。结果前期设计的7个sgRNA靶点基因活性均在95%以上,选择L2和R2作为最终的sgRNA靶点。注射受精卵74枚,移植60枚,得到6只F0代阳性鼠。经过繁育鉴定,最终得到稳定敲除AQP-9基因的纯合子AQP-9-/-小鼠。结论利用CRISPR/Cas9系统获得全身敲除AQP-9基因且可稳定遗传的纯合子AQP-9-/-小鼠。
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