【摘 要】
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目的 探讨腺病毒介导血管内皮生长因子受体(KDR)启动子驱动的CDglyTK融合基因(AdKDR-CDglyTK)体系联合survivin反义寡核苷酸(ASODN)对结直肠癌细胞(SW620)及血管内皮细胞(ECV
【机 构】
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南方医科大学附属珠江医院普通外科,上海交通大学微纳米科学技术研究院
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目的 探讨腺病毒介导血管内皮生长因子受体(KDR)启动子驱动的CDglyTK融合基因(AdKDR-CDglyTK)体系联合survivin反义寡核苷酸(ASODN)对结直肠癌细胞(SW620)及血管内皮细胞(ECV304)的特异性杀伤作用.方法 将质粒pAdEasy-KDR-CDglyTK在293细胞内包装、扩增产生重组腺病毒.体外感染表达KDR的SW620、ECV304细胞株,同时用survivin ASODN转染同一细胞株,观察腺病毒的感染效率和ASODN的转染情况.应用RT-PCR和Western印迹检测CDglyTK和survivin基因的表达,MIT法测定两者联合应用对细胞株的杀伤效应和旁观者效应.结果 survivin ASODN可转染重组腺病毒感染的细胞,并且两者的转染及感染效率无明显变化.CDglyTK可在SW620、ECV304细胞株高效表达.survivin ASODN可明显降低survivin蛋白表达.各基因治疗组细胞存活率明显低于阴性对照组(P《0.001).survivin ASODN与AdKDR-CDglyTK基因联用后,随着前药浓度的增加,细胞存活率迅速下降,两者联合作用与单一基因作用相比,差异具有统计学意义(P《0.05).但在GCV 100μg/ml、5-FC 2000μg/ml时,联合基因治疗组细胞存活率略低于单用AdKDR-CDglyTK,两者间差异无统计学意义(P》0.05).Survivin ASODN和AdKDR-CDglyTK联合作用,在前药浓度较低时表现为协同效应,并具有更明显的旁观者效应.结论 KDR启动子调控的AdKDR-CDglyTK体系和survivin ASODN基因联合,较单一基因具有更强的特异性杀伤结直肠癌细胞及血管内皮细胞的作用.
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