【摘 要】
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目的建立高效液相色谱外标法检测人纤维蛋白原中盐酸精氨酸含量,并对方法进行验证及初步应用。方法色谱柱:氨基键合柱(250 mm×4. 6 mm×5μm);流动相:乙腈-磷酸盐缓冲液(1∶
【机 构】
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山东泰邦生物制品有限公司; 泰安市妇幼保健院;
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目的建立高效液相色谱外标法检测人纤维蛋白原中盐酸精氨酸含量,并对方法进行验证及初步应用。方法色谱柱:氨基键合柱(250 mm×4. 6 mm×5μm);流动相:乙腈-磷酸盐缓冲液(1∶1);流速:1. 0 m L/min;紫外检测波长:205 nm;柱温:40℃;进样量:20μL,采用面积外标法计算盐酸精氨酸含量,并验证方法的系统适应性、线性范围、重复性、稳定性、准确度及定量限(LOQ)。应用建立的方法测定3批人纤维蛋白原中盐酸精氨酸的含量,并与《中国药典》三部(2015版)规定方法进行比较。结果该方法色谱峰型单一,且无其他干扰,盐酸精氨酸与甘氨酸的分离度为10. 54;盐酸精氨酸浓度在0. 116 2～0. 536 1 mg/mL范围内,与峰面积呈良好的线性关系,线性方程为:y=7 476. 695 68 x+72. 418 815,相关系数(R)为0. 999 24;同一人纤维蛋白原样品重复6次检测盐酸精氨酸含量的相对标准偏差(relativestandard deviation,RSD)为0. 22%;人纤维蛋白原样品于4℃放置0、4、8、12、16、20 h,盐酸精氨酸检测结果 RSD为0. 57%;高、中、低3个浓度加样样品检测结果平均回收率为(101. 36±1. 53)%,RSD为1. 51%;LOQ为0. 581μg/mL。两种方法检测3批样品盐酸精氨酸含量为25. 9～26. 3 g/L,两者差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论高效液相色谱外标法操作简便,重复性、稳定性、准确度良好,可用于人纤维蛋白原中盐酸精氨酸含量的测定。
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