【摘 要】
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根据酪氨酸激酶EphB2受体的碱基序列,用PCR方法扩增其结合配体的关键结构域N端球状区,定向克隆到融合表达质粒载体rRSET A中,转化大肠杆菌JM109(DE3).阳性克隆经IPTG诱导,由T
【机 构】
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第四军医大学生物化学与分子生物学教研室
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根据酪氨酸激酶EphB2受体的碱基序列,用PCR方法扩增其结合配体的关键结构域N端球状区,定向克隆到融合表达质粒载体rRSET A中,转化大肠杆菌JM109(DE3).阳性克隆经IPTG诱导,由T7启动子调控表达了氨基端带6个连续组氨酸残基的融合蛋白.电泳分析表明,表达的融合蛋白主要以包含体的形式存在,约占细菌总蛋白的14%.Western印迹确证,利用Ni-NTA金属螯合亲和色谱法在变性条件下对表达的蛋白进行纯化,得到纯度95%以上的融合蛋白.
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