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目的 分析Cu2+胁迫前后福寿螺谷胱甘肽S转移酶(PcGST)基因的表达规律,探讨福寿螺适应Cu2+的相关机制. 方法 80只福寿螺随机分为4组,每组20只福寿螺,Cu2+胁迫浓度分别为0、50、100、150 μg/L.分别于Cu2+胁迫后的0、1、7、14 d,各组随机取3只福寿螺,分离其肝脏、鳃、肾脏组织,分别提取组织中的RNA,逆转录为cDNA,实时荧光定量PCR检测Cu2+胁迫前后PcGST mRNA的相对表达量.基于Cu2+胁迫下的福寿螺基因转录组筛选获得PcGST基因,构建pET-28a-PcGST重组质粒,转化至大肠埃希菌(E.coil)BL21 (DE3)感受态细胞中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白表达情况.将转化菌株(含PcGST基因的E.coil)和非转化菌株(未转化的E.coil)等量分成6份,随机取3份作为Cu2+胁迫组(含0.2 mmol/L的CuS04),另3份作为对照组(不含CuS04),20℃、150 r/min摇床培养.每隔1h测定一次菌液吸光度(A600)值,连续测定6h.采用t检验比较转化菌株和非转化菌株对Cu2+的耐受能力. 结果 设定无Cu2+胁迫下的福寿螺组织中PcGST mRNA的相对表达量为1.0±0.0.肝脏组织中,50 μg/LCu2+胁迫下,PcGST mRNA的相对表达量于0～14 d呈持续上升趋势,峰值为4.9±0.5;100 μg/L、150 μg/L Cu2+胁迫下,PcGST mRNA的相对表达量先上升后下降,峰值均于7d出现,分别为13.0±3.0和12.2±2.2.鳃组织中,50 μg/L、100 μg/L Cu2+胁迫下,PcGST mRNA的相对表达量先上升后下降,峰值均于7d出现,分别为5.3±0.7和23.3±16.5;150 μg/L Cu2+胁迫下,PcGST mRNA的相对表达量也呈现先上升后下降的趋势,峰值于1d出现,为9.8±3.3.肾脏组织中,50 μg/L Cu2+胁迫下,PcGST mRNA的相对表达量随时间变化不显著;100 μg/L Cu2+胁迫下,PcGSTmRNA的相对表达量前期随时间变化不显著,于14 d出现显著增加,为3.9±1.0;150μg/L Cu2+胁迫下,PcGST mRNA的相对表达量于0～14 d呈持续上升趋势,峰值为18.0±0.8.PcGST基因PCR扩增产物约为600 bp.SDS-PAGE结果显示,PcGST蛋白的相对分子质量(Mr)约为26 370.LB液体培养基中,转化菌株与非转化菌株的生长曲线接近,最大A600值分别为1.5±0.0和1.4±0.0,差异无统计学意义(P＞0.05);含0.2 mmol/L CuSO4的LB液体培养基中,转化菌株的生长曲线优于非转化菌株,最大A600值分别为1.5±0.1和1.0±0.0,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 Cu2+胁迫能促进福寿螺体内PcGST基因的表达.