目的：建立同时测定不同产地鱼腥草中马兜铃内酰胺AⅡ、FⅠ和BⅡ 3个马兜铃内酰胺类成分的超高效液相色谱-质谱法（UPLC-MS/MS）。方法：选用Agilent SB-C18柱（50 mm × 2.1 mm，1.8 μm），以乙腈-0.1%甲酸为流动相进行等度洗脱，流速为0.3 mL·min–1，多反应监测模式，建立了鱼腥草中3种马兜铃内酰胺类成分的UPLC-MS/MS，在方法学验证的基础上对所有样品进行检测分析。运用SPSS 26.0和SIMCA 14.1进行差异性、聚类、相关性和主成分分析。结果：在考察的质量浓度范围内3个马兜铃内酰胺类成分的线性关系良好（r≥0.9998），加样回收率为83.77%～105.61%，RSD为1.14%～11.46%。14批鱼腥草中马兜铃内酰胺AⅡ、FⅠ和BⅡ的含量分别为0.757～19.538、1.418～15.971、2.893～70.131 μg·g-1。差异性分析表明，3个成分的含量与鱼腥草的产地、野生或种植无关。相关性分析表明，3个成分的含量成正相关。结论：所建立的方法准确、可靠，能够用于鱼腥草中3个马兜铃内酰胺类成分的检测分析。