论文部分内容阅读
目的探讨Toll样受体-4(Toll-like receptor 4,TLR4)修饰的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem Cells,BMSCs)对心肌梗死后心脏心功能的影响。方法取大鼠骨髓体外分离扩增培养BMSCs,将携带目的基因重组慢病毒载体(Lv-EGFP-TLR4)及空病毒载体(Lv-EGFP)分别转染至BMSCs;用ELISA检测Lv-EGFP-TLR4转染后BMSCs细胞上清液TLR4的表达。选用成年SD大鼠,结扎左冠状动脉前降支建立急性心肌梗死模型,随机分为3组(n=18):对照组、Lv-EGFP-BMSCs组、Lv-EGFP-TLR4-BMSCs组。分别将Lv-EGFP-BMSCs和Lv-EGFP-TLR4-BMSCs多点注射到大鼠心肌梗死区周边,对照组注射等量PBS;细胞移植第7天,用荧光显微镜追踪EGFP阳性细胞表达,Western blot检测梗死区周边TLR4的蛋白表达;细胞移植第28天,用超声心动图检测大鼠心功能,HE和MASSON染色观察心肌胶原纤维化程度,用ELISA检测血清Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)和Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNT)表达水平。结果 Lv-EGFP-TLR4转染BMSCs后,细胞上清液中TLR4的表达明显增多,浓度达到(31.55 pg/mL)。细胞移植第7d,心肌梗死区域有EGFP标记的BMSCs,Lv-EGFP-TLR4-BMSCs组的绿色荧光强度明显优于Lv-EGFP-BMSCs组,对照组无EGFP表达,TLR4蛋白表达也明显高于Lv-EGFP-BMSCs组(P<0.01)。细胞移植第28 d,Lv-EGFP-TLR4-BMSCs组左室射血分数[LVEF(44.36±5.62)%]和短轴缩短率[LVFS(22.88±9.89)%]较Lv-EGFP-BMSCs组[LVEF(18.41±5.66)%,LVFS(18.41±5.66)%]均明显增加(P<0.01),左心室收缩末径[LVDs(5.41±0.71)]和左心室舒张末径[LVDd(7.11±0.79)]值较Lv-EGFP-BMSCs组[LVDs(6.66±0.91),LVDd(8.06±0.96)]均明显缩小(P<0.01);血清中Lv-EGFP-TLR4-BMSCs组PⅠCP(72.88μg/L)和PⅢNP(7.33μg/L)蛋白浓度较Lv-EGFP-BMSCs组[PⅠCP(83.79μg/L)和PⅢNP(9.51μg/L)]减少(P<0.05);Lv-EGFP-TLR4-BMSCs组心肌纤维化程度也明显低于Lv-EGFP-BMSCs组。结论 TLR4基因修饰BMSCs移植治疗心肌梗死,进一步减轻心肌纤维化程度,从而改善心肌梗死大鼠的心功能。