论文部分内容阅读
摘要：目的： 探讨粪便标本的微生物检验措施。方法： 通过在实验室化验，掌握粪便的基本属性和状况，总结出系统的检验措施。结论： 科学准确的粪便检测措施，才能了解和掌握粪便的医学特点，为有效的控制和预防相关疾病提供可靠的依据。
关键词：：粪便；微生物；检验
【中图分类号】R446.13 【文献标识码】B 【文章编号】1672-8602（2014）01-0195-01
粪便是人或动物的食物残渣排泄物。粪便的四分之一是水分，其余大多是蛋白质、无机物、脂肪、未消化的食物纤维、脱了水的消化液残余、以及从肠道脱落的细胞和死掉的细菌，还有维生素K、维生素B。
1形成
食物在大便标本（2张）胃和肠道内进行消化、主要是各种消化酶的作用。结肠不产生酶，只有细菌起消化作用。结肠内有多种细菌，大肠杆菌70%，厌氧杆菌20%，还有链球菌、变形杆菌、葡萄球菌、乳杆菌、芽胞和酵母。另有极少原生动物和螺旋体。肠细菌的重要作用是能产生生理需要的物质，如食物缺乏维生素时可在肠内合成维生素K、维生素B1、B2、维生素H、维生素B12、B6、蔚酸，叶酸和消旋泛酸。
2临床意义
2.1肠道病原菌可引起人类感染性腹泻，也可由细菌代谢产物造成食物中毒，长期应用抗生素导致菌群紊乱也可引起严重腹泻，因此，应及早作出诊断，以免延误治疗。
2.2健康人体肠道内有许多正常菌群寄居，包括大量厌氧菌和大肠杆菌，肠杆菌等。
2.3肠道致病菌主要有沙门菌、志贺菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌、小肠结肠炎耶尔森菌、空肠弯曲菌、金黄色葡萄球菌、难辨梭菌、白念珠菌、结核分枝杆菌、气单胞菌、邻单胞菌和蜡样芽胞杆菌。
2.4致病性大肠杆菌包括5种类型肠毒素型大肠杆菌（ETEC）、肠侵袭型大肠杆菌（EIEC）、肠致病型大肠杆菌（EPEC）、肠出血型大肠杆菌（EHEC）和肠凝聚型大肠杆菌（EAggEC）。志贺菌属是肠杆菌科中引起人类感染性腹泻最常见的致病菌之一，主要引起人类细菌性痢疾，其中福氏和宋内志贺菌最为常见。菌痢主要有三种临床类型：急性细菌性痢疾、慢性细菌性痢疾和携带者。典型的急性菌痢初期为水样便，数日后为脓血便，伴有里急后重现象。
2.5沙门菌有较强的内毒素，可使体温升高，白细胞减少。主要通过污染食品和水源经口感染，临床上表现主要为三种类型：
2.5.1肠热症： 表现为发热，血培养或肥达反应阳性。
2.5.2胃肠炎： 此型最常见，引起轻型和爆发型腹泻，伴有低热，恶心和呕吐。
2.5.3菌血症和败血症： 多发生于儿童和免疫力低下的成年人，病原菌随血至组织，导致脑膜炎、心内膜炎、胆囊炎、骨髓炎等。往往出现血培养阳性而粪便培养阴性。
2.6出血性大肠杆菌引起严重的出血性肠炎，可发生在任何年龄，年龄小和老者死亡率高。少数患者并发溶血性尿毒综合征（HUS）。临床表现为低热，痉挛性腹泻，开始水样便，继而血样便。此病的诊断完全依靠细菌学检查，生化特征为不发酵山梨醇，可进行筛查[1]。
3标本要求
3.1粪便标本虽然含有多种杂菌，但应尽量使用无菌容器，采集新鲜粪便做培养。
3.2标本最好在用药前采集。
3.3腹泻患者应尽量在急性期采集标本（3天以内），以提高阳性率。
3.4采集脓血或黏液部分的新鲜粪便2～3g，液状粪便应挑取絮状物2～3ml。
3.5不易获得粪便时，可采用直肠拭子采样，即用无菌棉拭子经生理盐水湿润后，插入肛门内4～5cm（幼儿2～3cm）处，轻轻转动后取出，然后将拭子置于运送培养基或无菌试管内。
3.6标本置于无菌盒内、运送培养基或增菌培养基中立即送检。
3.7检查粪便中难辨梭菌，标本应尽量避免与空气接触，将标本置于密封盖试管中，量约试管2/3高度。
4仪器
25℃孵箱和37℃孵箱。
5试剂
（1）XLD琼脂平皿粪便标本中常见病原菌在XLD琼脂平皿上生长为红色或有黑心菌落。（2）山梨醇琼脂平皿大肠杆菌（0157）在山梨醇平皿上生长，利用山梨醇为无色透明菌落。（3）CCFA琼脂平皿选出艰难梭状芽胞杆菌。（4）庆大霉素平皿查霍乱弧菌。（5）碱性蛋白胨水查霍乱弧菌。（6）赛保罗平皿查真菌。（7）沙门菌、志贺菌及大肠杆菌Ol57：H7鉴定血清。
6操作步骤
6.1志贺菌属检验粪便标本-XLD平皿，37℃孵箱培养过夜-挑取可疑菌落（红色）转种克氏双糖培养基过夜-乳糖（-）、葡萄糖（+）、产气（-）、H2S（-）、动力（-）-志贺菌血清凝集和药敏试验-报告。
6.2沙门菌属检验： 粪便标本-XLD平皿，37℃孵箱培养过夜-挑取可疑菌落（红色、或有黑心）转种克氏双糖培养基培养过夜-乳糖（-）、葡萄糖（+）、产气（+）、H2S（+）、动力（+）-沙门菌血清凝集和药敏试验-报告。
6.3大肠杆菌Ol57： H7检验粪便标本-山梨醇平皿，37℃孵箱培养过夜-挑取可疑菌落（无色、透明）转种克氏双糖培养基培养过夜-乳糖（+）、葡萄糖（+）、产气（+）、H2S（-）、动力（+）-大肠杆菌Ol57：H7凝集试验-报告。
6.4霍乱弧菌检验取米泔样粪便2ml，接种于碱性蛋白胨水中，35℃增菌6小时后，取表面生长物或菌膜，用划线分离法接种庆大霉素平皿，35℃培养18～24小时，观察有无灰青色菌落，挑取可疑菌落与霍乱弧菌01和0139诊断血清分别做玻片凝集试验[2]。
6.5难辨梭状芽胞杆菌检验：取送检试管中深部的液状粪便接种CCFA平皿，35℃厌氧环境培养48小时后，挑选不透明，黄色，边缘不整齐的粗糙型菌落，做革兰染色，如看到革兰阳性杆菌且次极端有卵圆形芽胞，做进一步生化鉴定。
6.6真菌检验将标本接种赛保罗平皿，25℃和35℃培养，根据染色形态，菌落特征及生化试验进一步鉴定。
参考文献
[1]热西旦·沙吾提，吴新华.腹泻患者粪便病原微生物培养方法分析.中国保健营养（下旬刊），2012，22（07）：1866-1867.
[2]苏加云.腹泻患者粪便病原微生物培养方法的探讨.检验医学与临床，2011，08（08）：924-925，327.
关键词：：粪便；微生物；检验
【中图分类号】R446.13 【文献标识码】B 【文章编号】1672-8602（2014）01-0195-01
粪便是人或动物的食物残渣排泄物。粪便的四分之一是水分，其余大多是蛋白质、无机物、脂肪、未消化的食物纤维、脱了水的消化液残余、以及从肠道脱落的细胞和死掉的细菌，还有维生素K、维生素B。
1形成
食物在大便标本（2张）胃和肠道内进行消化、主要是各种消化酶的作用。结肠不产生酶，只有细菌起消化作用。结肠内有多种细菌，大肠杆菌70%，厌氧杆菌20%，还有链球菌、变形杆菌、葡萄球菌、乳杆菌、芽胞和酵母。另有极少原生动物和螺旋体。肠细菌的重要作用是能产生生理需要的物质，如食物缺乏维生素时可在肠内合成维生素K、维生素B1、B2、维生素H、维生素B12、B6、蔚酸，叶酸和消旋泛酸。
2临床意义
2.1肠道病原菌可引起人类感染性腹泻，也可由细菌代谢产物造成食物中毒，长期应用抗生素导致菌群紊乱也可引起严重腹泻，因此，应及早作出诊断，以免延误治疗。
2.2健康人体肠道内有许多正常菌群寄居，包括大量厌氧菌和大肠杆菌，肠杆菌等。
2.3肠道致病菌主要有沙门菌、志贺菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌、小肠结肠炎耶尔森菌、空肠弯曲菌、金黄色葡萄球菌、难辨梭菌、白念珠菌、结核分枝杆菌、气单胞菌、邻单胞菌和蜡样芽胞杆菌。
2.4致病性大肠杆菌包括5种类型肠毒素型大肠杆菌（ETEC）、肠侵袭型大肠杆菌（EIEC）、肠致病型大肠杆菌（EPEC）、肠出血型大肠杆菌（EHEC）和肠凝聚型大肠杆菌（EAggEC）。志贺菌属是肠杆菌科中引起人类感染性腹泻最常见的致病菌之一，主要引起人类细菌性痢疾，其中福氏和宋内志贺菌最为常见。菌痢主要有三种临床类型：急性细菌性痢疾、慢性细菌性痢疾和携带者。典型的急性菌痢初期为水样便，数日后为脓血便，伴有里急后重现象。
2.5沙门菌有较强的内毒素，可使体温升高，白细胞减少。主要通过污染食品和水源经口感染，临床上表现主要为三种类型：
2.5.1肠热症： 表现为发热，血培养或肥达反应阳性。
2.5.2胃肠炎： 此型最常见，引起轻型和爆发型腹泻，伴有低热，恶心和呕吐。
2.5.3菌血症和败血症： 多发生于儿童和免疫力低下的成年人，病原菌随血至组织，导致脑膜炎、心内膜炎、胆囊炎、骨髓炎等。往往出现血培养阳性而粪便培养阴性。
2.6出血性大肠杆菌引起严重的出血性肠炎，可发生在任何年龄，年龄小和老者死亡率高。少数患者并发溶血性尿毒综合征（HUS）。临床表现为低热，痉挛性腹泻，开始水样便，继而血样便。此病的诊断完全依靠细菌学检查，生化特征为不发酵山梨醇，可进行筛查[1]。
3标本要求
3.1粪便标本虽然含有多种杂菌，但应尽量使用无菌容器，采集新鲜粪便做培养。
3.2标本最好在用药前采集。
3.3腹泻患者应尽量在急性期采集标本（3天以内），以提高阳性率。
3.4采集脓血或黏液部分的新鲜粪便2～3g，液状粪便应挑取絮状物2～3ml。
3.5不易获得粪便时，可采用直肠拭子采样，即用无菌棉拭子经生理盐水湿润后，插入肛门内4～5cm（幼儿2～3cm）处，轻轻转动后取出，然后将拭子置于运送培养基或无菌试管内。
3.6标本置于无菌盒内、运送培养基或增菌培养基中立即送检。
3.7检查粪便中难辨梭菌，标本应尽量避免与空气接触，将标本置于密封盖试管中，量约试管2/3高度。
4仪器
25℃孵箱和37℃孵箱。
5试剂
（1）XLD琼脂平皿粪便标本中常见病原菌在XLD琼脂平皿上生长为红色或有黑心菌落。（2）山梨醇琼脂平皿大肠杆菌（0157）在山梨醇平皿上生长，利用山梨醇为无色透明菌落。（3）CCFA琼脂平皿选出艰难梭状芽胞杆菌。（4）庆大霉素平皿查霍乱弧菌。（5）碱性蛋白胨水查霍乱弧菌。（6）赛保罗平皿查真菌。（7）沙门菌、志贺菌及大肠杆菌Ol57：H7鉴定血清。
6操作步骤
6.1志贺菌属检验粪便标本-XLD平皿，37℃孵箱培养过夜-挑取可疑菌落（红色）转种克氏双糖培养基过夜-乳糖（-）、葡萄糖（+）、产气（-）、H2S（-）、动力（-）-志贺菌血清凝集和药敏试验-报告。
6.2沙门菌属检验： 粪便标本-XLD平皿，37℃孵箱培养过夜-挑取可疑菌落（红色、或有黑心）转种克氏双糖培养基培养过夜-乳糖（-）、葡萄糖（+）、产气（+）、H2S（+）、动力（+）-沙门菌血清凝集和药敏试验-报告。
6.3大肠杆菌Ol57： H7检验粪便标本-山梨醇平皿，37℃孵箱培养过夜-挑取可疑菌落（无色、透明）转种克氏双糖培养基培养过夜-乳糖（+）、葡萄糖（+）、产气（+）、H2S（-）、动力（+）-大肠杆菌Ol57：H7凝集试验-报告。
6.4霍乱弧菌检验取米泔样粪便2ml，接种于碱性蛋白胨水中，35℃增菌6小时后，取表面生长物或菌膜，用划线分离法接种庆大霉素平皿，35℃培养18～24小时，观察有无灰青色菌落，挑取可疑菌落与霍乱弧菌01和0139诊断血清分别做玻片凝集试验[2]。
6.5难辨梭状芽胞杆菌检验：取送检试管中深部的液状粪便接种CCFA平皿，35℃厌氧环境培养48小时后，挑选不透明，黄色，边缘不整齐的粗糙型菌落，做革兰染色，如看到革兰阳性杆菌且次极端有卵圆形芽胞，做进一步生化鉴定。
6.6真菌检验将标本接种赛保罗平皿，25℃和35℃培养，根据染色形态，菌落特征及生化试验进一步鉴定。
参考文献
[1]热西旦·沙吾提，吴新华.腹泻患者粪便病原微生物培养方法分析.中国保健营养（下旬刊），2012，22（07）：1866-1867.
[2]苏加云.腹泻患者粪便病原微生物培养方法的探讨.检验医学与临床，2011，08（08）：924-925，327.