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摘 要：为取得良好的同期发情效果和排卵率，采用PMSG和HCG激素联合使用诱导母犬发情和排卵。采用外部观法和公犬试情的发情鉴定方法，观察PMSG和HCG对犬诱导发情的影响，结果：PMSG连用5 d的Ⅱ实验组和连用7 d的Ⅲ实验组均表现出100%的发情率，并且均高于连用3 d的Ⅰ试验组的发情率（40%）和空白对照组的发情率（0%）。同时，利用外科手术的方法观察发情母犬排卵情况，结果：Ⅴ组和Ⅵ组2个实验组均获得了100%发情率，发情母犬分别获得55%和75%的排卵率，且排卵率两者差异显著（P<0.05）。试验证明外源使用PMSG和HCG可以有效诱导乏情期母犬同期发情和排卵。
关键词：工作犬；外源激素；同期发情；诱导排卵
近年来，随着中国经济和社会发展水平的不断提高，对宠物犬、工作犬需求也大幅提升，尤其是对工作犬提出了更高的质量要求。由于犬存在特殊的生殖生理特性和繁殖规律，犬虽为多胎生动物，但是发情周期比较长，通常在126～240 d（4～8个月，平均为6个月）[1-2]，若错过发情期或发情期未受孕，产仔数就会大大减少。试验借鉴在猪牛羊等大家畜领域应用较为广泛的采用PMSG+HCG外源激素处理方法，结合犬在生殖生理上的特殊性，针对本地区气候条件下的乏情期母犬进行诱导发情，并观察诱导发情犬排卵效果，旨在建立一种适合于本地区气候条件的、具有实践价值的诱导工作犬同期发情的技术体系，以缩短工作犬的繁殖周期或实现同期、统一配种繁殖，达到提高工作犬繁殖力，实现订单式高效益工作犬繁育的目的。同时，可靠的同期发情诱导在犬的胚胎移植中的作用也是至关重要的。
1 材料与方法
1.1试验材料
1.1.1试验动物
选择公安部昆明警犬基地健康母犬，包括昆明犬、马里努阿犬2个犬种，年龄1～2岁，未经产处于间情期。犬只开始试验时进行集中饲养统一管理，每天饲喂2次，自由饮水，使试验在同一水平进行。
1.1.2 试验地点与时间
本试验均在云南省昆明市盘龙区黑龙潭公安部昆明警犬基地内完成。试验一：2013年8月15日至2013月9月5日；试验二：2013年9月10日至2013月9月30日。
1.1.3主要试剂与药物
孕马血清促性腺激素（PMSG），由宁波第二激素厂生产，生产批号：130422；人绒毛膜促性腺激素（HCG），由宁波第二激素厂生产，生产批号：130408。
1.2 试验方法
1.2.1激素处理
试验一：将40只供试犬随机分成4组，每组10只，每组均是8只昆明犬，2只马里努阿犬。3个实验组，1个对照组。按表1所示方式给药处理，观察和统计犬只的发情情况。
试验二：将40只供试犬随机分成2组，每组20只，每组均是18只昆明犬，2只马里努阿犬。按表2所示方式给药处理。观察和统计犬只的发情情况，利用手术剖腹的方法观察适配发情犬卵泡发育和排卵情况。
1.2.2诱导犬发情的鉴定方法
1.2.2.1外阴和行为变化
发情犬的阴门水肿变大，阴门下角悬垂有小滴，阴道出现血样分泌物时说明犬进入发情前期，此时犬表现不安及激动，有的母犬相互爬跨，但公犬试情不接受爬跨；当阴唇水肿非常明显，尾偏向一侧，阴门开张，阴道分泌物由血红色变为无色透明或淡黄色，此时为发情期；从发情前期至发情期母犬的阴唇横径急剧增大，至发情期则变得柔软，在排卵前阴唇横径急剧缩小，之后再度增大。当阴门水肿迅速消失，阴道仅有少量黏液排出，母犬表现安静、松弛，对公犬的吸引作用降低为发情后期；阴门无任何肿大，外部看发情周期的任何变化为间情期。
1.2.2.2公犬试情法
每天观察母犬的外观表现及外生殖器的变化，当发现阴门流出的黏性分泌物中含有血时，用性欲旺盛的具有交配经验的公犬进行试情。每天早晨7：00和晚上19：00试情两次。试情所用的公犬要求有交配经验，已实施过输精管切除术，性欲旺盛的公犬。母犬和公犬嬉戏，当公犬阴茎接触母犬外阴部时，母犬将尾巴歪向一侧，接受公犬爬跨。此时期将人的手指插入母犬阴道时，母犬不表现抵抗，则判定为发情期。
1.2.2.3 排卵情况鉴定
对通过发情鉴定判断为最适配种时间的发情母犬，采用手术剖腹的方法观察卵泡发育情况，以“处于发情期卵巢肉眼可见多个直径约1～10 mm大小不等的透亮卵泡分布，形状为球形或半球形，边界清晰，明显突出卵巢表面，刚刚排出卵母细胞的卵泡破裂后呈血红色，并明显可见一凸出略外翻的小孔，继而已排空的卵泡将由红体发育为黄体”为标准，来判断诱导发情母犬是否排卵。
1.3统计学分析
试验所得数据采用SPSS 2.0软件进行统计分析。
发情率：母犬应用药物处理后，计算发情母犬数所占的百分比；
发情率=发情犬只数/药物处理的犬只数×100%；
诱导排卵成功率=排卵犬只数/发情犬只数×100%；
2 结果
2.1 试验一：外部观察法及试情法的测定结果
从表3可以看出，经PMSG+HCG外源激素处理试验犬只诱导发情率均高于空白对照组，且发情犬只表现出了一定的发情症状及行为表现，表明该外源激素对犬只的诱导同情发情具有明显作用。并且Ⅱ组和Ⅲ组处理的试验犬在激素处理完后的5～7 d都表现出100%的发情率，均高于Ⅰ组40%的发情率，说明其激素处理方案均优于Ⅰ组。
2.2 试验二：外源激素诱导工作犬同期发情及排卵的效果观察
按表2的方式对试验犬只进行诱导发情处理，2个组别的犬只均获得100%发情率，然后通过对发情犬只诱导排卵情况观察及鉴定，Ⅴ组有55%的发情犬只成功诱导排卵，Ⅵ组有75%的发情犬只成功诱导排卵，并且Ⅵ试验处理组诱导排卵成功率显著高于Ⅴ组排卵成功率（P<0.05，差异显著），详见表4。 3 讨论与结论
犬虽是多胎动物，但母犬非季节性单次发情，发情间隔时间长，有一个较长的乏情期，期间卵巢是处于静止状态的[3]。而公犬本身不受季节的限制，只要母犬允许，任何时候都可以进行交配[4]。母犬较长时间的乏情期就降低了母犬的受孕和繁殖几率[5]。在犬的乏情期，对繁殖机能正常的母犬应用外源性激素诱导母犬同期发情，再结合外界因素如提高环境质量、优化饲养状况等方法，可以缩短母犬的发情间隔，提高繁殖效率[6]。另外通过激素处理，诱导母犬在同一段相对集中时期内集中发情并排卵[7]，这对于规模化养殖中的配种、产仔、培育、断奶和防疫等工作的统一管理都具有重要意义。本试验旨在探讨在云南昆明这一特定的地理环境和气候条件下，利用PMSG结合HCG对昆明犬和马里努阿犬进行同期发情，以期为本地规模化犬的繁殖育种提供参考。
从试验一和试验二供试犬的外观表现和试情来看， Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅴ组和Ⅵ组的母犬在1～2 d内出现相对集中的发情表现，且发情率及同期发情率均高于相同条件下自然发情的母犬，这表明本试验选用的PMSG+HCG激素和使用程序能很好地诱导工作犬同情发情及排卵。这主要可能是因为PMSG对母犬具有催情并促使其排出成熟卵子的作用，而HCG具有使卵泡成熟和排卵的作用，与PMSG联合使用，从而促使母犬卵母细胞发育成熟，排出更多的成熟卵子。对照组未经激素处理则均无发情表现，激素处理组的发情率与发情同期率相对于空白对照组均较高。
从试验开展的时间分析，试验一是在夏季，试验二是在秋季，夏季属于犬只发情较零散的季节，而秋季属于犬只发情较集中的季节[12]，但经外源激素处理后2个试验均获得了理想的发情率（100%），这证明本试验建立的使用外源激素PMSG+HCG诱导工作犬同期发情技术和方法是可行的，具有普遍推广应用的价值。
另外，从本试验还可以看出，诱导发情的工作犬，经发情排卵鉴定和观察，其诱导排卵成功率普遍较低，原因可能是由于PMSG的强烈刺激导致母犬的正常卵泡成熟期缩短，发情前期和发情期时间缩短，黄体功能不足，这与之前的报道结果吻合[8-11]。（下转72页）
（上接70页）在试验中，应用外源激素对犬的发情诱导情况和排卵的情况进行了研究，但未对这两种激素应用下犬的配种、受胎率和产仔率情况等进行研究和观察，有待今后进一步深入研究。（编辑：狄慧）
参考文献：
[1] 唐树生，刘庆，孙琳.警用幼犬的护理与培训[M].北京：中国人民公安大学出版社，2012：93.
[2] 李厚达.试验动物学 [M].2版.北京：中国农业出版社，2003：265.
[3] 赵红斌，胡仲明，张玉生，等.外源激素对间情期毕格犬发情及妊娠的影响[J].中国兽医学报，1997，17（2）：185-186.
[4] 李愚夫.养狗大全[M].南宁：广西美术出版社，1992：54-58.
[5] Chakraborty PK， Wildt DE， Seager SWJ. Induction of estrus and ovulation in the cat and dog.[J].Vet Clin N Am Small Anim Pract 1982，（12）：85-91.
[6] Kutzler MA. Induction and synchronization of estrus in dogs [J].Theriogenology.2005 ：64（3）：766-775.
[7] 杜晓鹏，彭建国.狗的繁殖[M].昆明：云南科技出版社，2012：184.
[8] Jones GE， Boyns AR， Bell ET， Christie DW， et al. Immunoreactive luteinizing hormone and progesterone during pregnancy and following gonadotropin administration in beagle bitches[J].Acta Endo-crinol 1973，72：573-81.
[9] Nakao T， Yukiyo A， Fukushima S， et al. Induction of estrus in bitches with exogenous gonadotropins， and pregnancy rate and blood progesterone profiles [J]. Jpn J Vet Sci ，1985，47：17-24.
[10] Weilenmann R， Arnold S， Dobeli M， Rusch P， et al. Estrus induction in bitches by the administration of PMSG and HCG[J]. Schweiz Arch Tierheilkd，1993，135：236-41.
[11] 余道伦.Beagle犬诱导发情、人工授精和输卵管胚胎移植技术的研究[D].扬州：扬州大学， 2006.
[12] 兰康.犬发情季节性观察[J].养犬，2010，4：19-21.
关键词：工作犬；外源激素；同期发情；诱导排卵
近年来，随着中国经济和社会发展水平的不断提高，对宠物犬、工作犬需求也大幅提升，尤其是对工作犬提出了更高的质量要求。由于犬存在特殊的生殖生理特性和繁殖规律，犬虽为多胎生动物，但是发情周期比较长，通常在126～240 d（4～8个月，平均为6个月）[1-2]，若错过发情期或发情期未受孕，产仔数就会大大减少。试验借鉴在猪牛羊等大家畜领域应用较为广泛的采用PMSG+HCG外源激素处理方法，结合犬在生殖生理上的特殊性，针对本地区气候条件下的乏情期母犬进行诱导发情，并观察诱导发情犬排卵效果，旨在建立一种适合于本地区气候条件的、具有实践价值的诱导工作犬同期发情的技术体系，以缩短工作犬的繁殖周期或实现同期、统一配种繁殖，达到提高工作犬繁殖力，实现订单式高效益工作犬繁育的目的。同时，可靠的同期发情诱导在犬的胚胎移植中的作用也是至关重要的。
1 材料与方法
1.1试验材料
1.1.1试验动物
选择公安部昆明警犬基地健康母犬，包括昆明犬、马里努阿犬2个犬种，年龄1～2岁，未经产处于间情期。犬只开始试验时进行集中饲养统一管理，每天饲喂2次，自由饮水，使试验在同一水平进行。
1.1.2 试验地点与时间
本试验均在云南省昆明市盘龙区黑龙潭公安部昆明警犬基地内完成。试验一：2013年8月15日至2013月9月5日；试验二：2013年9月10日至2013月9月30日。
1.1.3主要试剂与药物
孕马血清促性腺激素（PMSG），由宁波第二激素厂生产，生产批号：130422；人绒毛膜促性腺激素（HCG），由宁波第二激素厂生产，生产批号：130408。
1.2 试验方法
1.2.1激素处理
试验一：将40只供试犬随机分成4组，每组10只，每组均是8只昆明犬，2只马里努阿犬。3个实验组，1个对照组。按表1所示方式给药处理，观察和统计犬只的发情情况。
试验二：将40只供试犬随机分成2组，每组20只，每组均是18只昆明犬，2只马里努阿犬。按表2所示方式给药处理。观察和统计犬只的发情情况，利用手术剖腹的方法观察适配发情犬卵泡发育和排卵情况。
1.2.2诱导犬发情的鉴定方法
1.2.2.1外阴和行为变化
发情犬的阴门水肿变大，阴门下角悬垂有小滴，阴道出现血样分泌物时说明犬进入发情前期，此时犬表现不安及激动，有的母犬相互爬跨，但公犬试情不接受爬跨；当阴唇水肿非常明显，尾偏向一侧，阴门开张，阴道分泌物由血红色变为无色透明或淡黄色，此时为发情期；从发情前期至发情期母犬的阴唇横径急剧增大，至发情期则变得柔软，在排卵前阴唇横径急剧缩小，之后再度增大。当阴门水肿迅速消失，阴道仅有少量黏液排出，母犬表现安静、松弛，对公犬的吸引作用降低为发情后期；阴门无任何肿大，外部看发情周期的任何变化为间情期。
1.2.2.2公犬试情法
每天观察母犬的外观表现及外生殖器的变化，当发现阴门流出的黏性分泌物中含有血时，用性欲旺盛的具有交配经验的公犬进行试情。每天早晨7：00和晚上19：00试情两次。试情所用的公犬要求有交配经验，已实施过输精管切除术，性欲旺盛的公犬。母犬和公犬嬉戏，当公犬阴茎接触母犬外阴部时，母犬将尾巴歪向一侧，接受公犬爬跨。此时期将人的手指插入母犬阴道时，母犬不表现抵抗，则判定为发情期。
1.2.2.3 排卵情况鉴定
对通过发情鉴定判断为最适配种时间的发情母犬，采用手术剖腹的方法观察卵泡发育情况，以“处于发情期卵巢肉眼可见多个直径约1～10 mm大小不等的透亮卵泡分布，形状为球形或半球形，边界清晰，明显突出卵巢表面，刚刚排出卵母细胞的卵泡破裂后呈血红色，并明显可见一凸出略外翻的小孔，继而已排空的卵泡将由红体发育为黄体”为标准，来判断诱导发情母犬是否排卵。
1.3统计学分析
试验所得数据采用SPSS 2.0软件进行统计分析。
发情率：母犬应用药物处理后，计算发情母犬数所占的百分比；
发情率=发情犬只数/药物处理的犬只数×100%；
诱导排卵成功率=排卵犬只数/发情犬只数×100%；
2 结果
2.1 试验一：外部观察法及试情法的测定结果
从表3可以看出，经PMSG+HCG外源激素处理试验犬只诱导发情率均高于空白对照组，且发情犬只表现出了一定的发情症状及行为表现，表明该外源激素对犬只的诱导同情发情具有明显作用。并且Ⅱ组和Ⅲ组处理的试验犬在激素处理完后的5～7 d都表现出100%的发情率，均高于Ⅰ组40%的发情率，说明其激素处理方案均优于Ⅰ组。
2.2 试验二：外源激素诱导工作犬同期发情及排卵的效果观察
按表2的方式对试验犬只进行诱导发情处理，2个组别的犬只均获得100%发情率，然后通过对发情犬只诱导排卵情况观察及鉴定，Ⅴ组有55%的发情犬只成功诱导排卵，Ⅵ组有75%的发情犬只成功诱导排卵，并且Ⅵ试验处理组诱导排卵成功率显著高于Ⅴ组排卵成功率（P<0.05，差异显著），详见表4。 3 讨论与结论
犬虽是多胎动物，但母犬非季节性单次发情，发情间隔时间长，有一个较长的乏情期，期间卵巢是处于静止状态的[3]。而公犬本身不受季节的限制，只要母犬允许，任何时候都可以进行交配[4]。母犬较长时间的乏情期就降低了母犬的受孕和繁殖几率[5]。在犬的乏情期，对繁殖机能正常的母犬应用外源性激素诱导母犬同期发情，再结合外界因素如提高环境质量、优化饲养状况等方法，可以缩短母犬的发情间隔，提高繁殖效率[6]。另外通过激素处理，诱导母犬在同一段相对集中时期内集中发情并排卵[7]，这对于规模化养殖中的配种、产仔、培育、断奶和防疫等工作的统一管理都具有重要意义。本试验旨在探讨在云南昆明这一特定的地理环境和气候条件下，利用PMSG结合HCG对昆明犬和马里努阿犬进行同期发情，以期为本地规模化犬的繁殖育种提供参考。
从试验一和试验二供试犬的外观表现和试情来看， Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅴ组和Ⅵ组的母犬在1～2 d内出现相对集中的发情表现，且发情率及同期发情率均高于相同条件下自然发情的母犬，这表明本试验选用的PMSG+HCG激素和使用程序能很好地诱导工作犬同情发情及排卵。这主要可能是因为PMSG对母犬具有催情并促使其排出成熟卵子的作用，而HCG具有使卵泡成熟和排卵的作用，与PMSG联合使用，从而促使母犬卵母细胞发育成熟，排出更多的成熟卵子。对照组未经激素处理则均无发情表现，激素处理组的发情率与发情同期率相对于空白对照组均较高。
从试验开展的时间分析，试验一是在夏季，试验二是在秋季，夏季属于犬只发情较零散的季节，而秋季属于犬只发情较集中的季节[12]，但经外源激素处理后2个试验均获得了理想的发情率（100%），这证明本试验建立的使用外源激素PMSG+HCG诱导工作犬同期发情技术和方法是可行的，具有普遍推广应用的价值。
另外，从本试验还可以看出，诱导发情的工作犬，经发情排卵鉴定和观察，其诱导排卵成功率普遍较低，原因可能是由于PMSG的强烈刺激导致母犬的正常卵泡成熟期缩短，发情前期和发情期时间缩短，黄体功能不足，这与之前的报道结果吻合[8-11]。（下转72页）
（上接70页）在试验中，应用外源激素对犬的发情诱导情况和排卵的情况进行了研究，但未对这两种激素应用下犬的配种、受胎率和产仔率情况等进行研究和观察，有待今后进一步深入研究。（编辑：狄慧）
参考文献：
[1] 唐树生，刘庆，孙琳.警用幼犬的护理与培训[M].北京：中国人民公安大学出版社，2012：93.
[2] 李厚达.试验动物学 [M].2版.北京：中国农业出版社，2003：265.
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[5] Chakraborty PK， Wildt DE， Seager SWJ. Induction of estrus and ovulation in the cat and dog.[J].Vet Clin N Am Small Anim Pract 1982，（12）：85-91.
[6] Kutzler MA. Induction and synchronization of estrus in dogs [J].Theriogenology.2005 ：64（3）：766-775.
[7] 杜晓鹏，彭建国.狗的繁殖[M].昆明：云南科技出版社，2012：184.
[8] Jones GE， Boyns AR， Bell ET， Christie DW， et al. Immunoreactive luteinizing hormone and progesterone during pregnancy and following gonadotropin administration in beagle bitches[J].Acta Endo-crinol 1973，72：573-81.
[9] Nakao T， Yukiyo A， Fukushima S， et al. Induction of estrus in bitches with exogenous gonadotropins， and pregnancy rate and blood progesterone profiles [J]. Jpn J Vet Sci ，1985，47：17-24.
[10] Weilenmann R， Arnold S， Dobeli M， Rusch P， et al. Estrus induction in bitches by the administration of PMSG and HCG[J]. Schweiz Arch Tierheilkd，1993，135：236-41.
[11] 余道伦.Beagle犬诱导发情、人工授精和输卵管胚胎移植技术的研究[D].扬州：扬州大学， 2006.
[12] 兰康.犬发情季节性观察[J].养犬，2010，4：19-21.