【摘 要】
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目的将ｆａｓ基因转导入胃癌耐药细胞，建立高表达ｆａｓ的耐药株，比较转导前后ｆａｓｍＲＮＡ与蛋白的表达水平，观察转导株对化疗药物的敏感性．方法采用分子克隆技术将人ｆａｓ基因的全长ｃＤＮＡ片段插入真核表达载体ｐＢＫＣＭＶ的
【机 构】
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第四军医大学西京医院消化疾病研究所
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目的将ｆａｓ基因转导入胃癌耐药细胞，建立高表达ｆａｓ的耐药株，比较转导前后ｆａｓｍＲＮＡ与蛋白的表达水平，观察转导株对化疗药物的敏感性．方法采用分子克隆技术将人ｆａｓ基因的全长ｃＤＮＡ片段插入真核表达载体ｐＢＫＣＭＶ的多克隆位点之间，并借助脂质体将重组表达载体转导入人胃癌多药耐药细胞ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ，Ｇ４１８筛选克隆细胞，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ观察ｆａｓ基因的表达，ＭＴＴ法检测转导株对ＶＣＲ，ＣＤＤＰ，５ＦＵ的敏感性．结果成功地构建了真核表达载体ｐＢＫｆａｓ；转导细胞后，从２×１０５细胞中筛选出大约１２０个抗性克隆，转导率大于０５‰，随机挑选２个克隆继续筛选与扩增培养，最终获得了１株稳定的抗性细胞，命名为ｆａｓＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ；杂交结果表明，转导株与非转导株均有ｆａｓ基因的表达，但转导株ｆａｓｍＲＮＡ及其蛋白水平显著高于非转导株；ＭＴＴ实验结果显示，转导株对ＶＣＲ，ＣＤＤＰ，５ＦＵ的敏感性显著升高．结论在胃癌耐药细胞中ｆａｓ基因处于低表达状态．将ｆａｓ基因全长ｃＤＮＡ导入耐药细胞，能有效增强ｆａｓｍＲＮＡ及其蛋白的表达水平，并使耐药细胞对化疗药物的敏感性显著?
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