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【摘要】
目的:通过拆方的方法探讨蒙药“肋柱花—4味汤”配伍规律。方法:将蒙药“肋柱花-4味汤”拆成肋柱花＋栀子、肋柱花＋瞿麦、肋柱花＋胡黄连等三个药对，分别给急性肝损伤模型大鼠灌胃给药，在不同时间点取血，分离血清，再以高效液相色谱（HPLC）法测定各血清样品中獐牙菜苦苷的含量。结果:含地格达-4味汤血清中獐牙菜苦苷含量在不同给药时间点均明显高于三对药物含量。结论:初步判定地格达-4味汤的组方具有合理性和科学性。
【中图分类号】R247.4 【文献标识码】B 【文章编号】1005-0515(2011)10-0474-01
1材料
1.1 药品与试剂:
地格达-4味汤，獐牙菜苦苷标准品，色谱甲醇，纯净水。
1.2 仪器:
高效液相色谱仪（SHIMADZU SPD-M10A LC-10AT），NA-5L氮气空气一体机，离心机，分析天平。
1.3 动物:
SD大鼠，SPF级，雄性，体重（250±10g），北京维通利华实验动物中心提供，合格证号SCXK（京）2002-2003。
2 方法
2.1 色谱条件:
色谱条件：Dimaonsil，C18柱（250mm×4.6mm, 5?m）；流动相：甲醇-水（0.1磷酸）（22:78）；流速：1ml/min；柱温：30℃；波长：238nm，进样量为10μL。
2.2 急性肝损伤大鼠模型的复制及血清样品的处理:
健康Wistar大鼠290只，随机分为5组，实验组按300mg/kg腹腔注入D-GlaN生理盐水溶液，禁食水24h后按0.8g/100g剂量灌胃给予实验药物，给药后于15、30、45、60、90、120、180、240、480 min分别腹主动脉取血，离心后得血清。精密吸取待测血清300μL,置2mL试管内,加入3倍体积甲醇,涡旋混匀2min,以12000r·min-1离心10min,吸取全部上清液,分别置于另一1mL试管内,氮气发生仪上吹干样品,加入100μL甲醇,涡旋混匀2min,再次12000r·min-1离心10min,取上清液按2.1项所述色谱条件下进样。
2.3 对照品溶液的配制: 精密称取獐芽菜苦苷标准品1.2mg，以甲醇溶解于10mL容量瓶中，定容至刻度，即得浓度为0.12Kg/L的獐芽菜苦苷对照品母液，吸取本母液1mL加甲醇定容至10mL容量瓶中，即得浓度为0.012Kg/L的獐芽菜苦苷对照品溶液。
3 结果
3.1线性关系的考察: 獐芽菜苦苷对照品母液中分别取100、200、400、800、1600、3200μL加甲醇定容至10mL容量瓶中，分别取50μL在37℃下氮气流吹干，以100μL甲醇复溶，微型旋涡混合仪混合2min，取上清液1.2项所述色谱条件下进样2.1项所述色谱条件下进样。以獐芽菜苦苷峰面积（Y）对獐芽菜苦苷浓度（X）作线性回归。獐芽菜苦苷标准曲线回归方程为Y=4677193X-3592, r=0.9996.线性范围为0.6—19.2mg/L。
3.2回归率及精密度实验: 獐芽菜苦苷对照品母液中取100、800、3200μL加甲醇定容至10mL容量瓶中，分别取50μL加250μL空白血清后加900μL甲醇后微型旋涡混合仪混合2 min,4000r/min离心10min，吸取上清液后在37℃下氮气流吹干，以100μL甲醇复溶，微型旋涡混合仪混合2min，2.1项所述色谱条件下进样。按峰面积计算回归率、日间及日内精密度。其低、中、高3个浓度的回归率分别为86.39+4.09，相对标准偏差（RSD）4.74%；98.92+3.09，RSD3.12%；89.21+5.38，6.03%（n=5）。日内精密度的RSD值分别为7.49%，5.80%，4.89%；日间精密度的RSD值分别为7.01%，4.98%，4.23%（n=5）。
3.3样品稳定性试验: 獐芽菜苦苷对照品母液中取100、800、3200μL加甲醇定容至10mL容量瓶中，分别取50μL加250μL空白血清后加900μL甲醇后微型旋涡混合仪混合2 min,4000r/min离心10min，吸取上清液后在37℃下氮气流吹干，以100μL甲醇复溶，微型旋涡混合仪混合2min取上清液，分别在0、6、12h于2.1项所述色谱条件下进样。结果表明獐芽菜苦苷在12h内稳定性良好，RSD值分别为10.79%，9.04%，11.38%（n=5）。
3.4各样品獐牙菜苦苷血药浓度—时间曲线图。含地格达-4味汤血清中獐牙菜苦苷含量在不同给药时间点均明显高于三对药物含量。
4 讨论
獐牙菜苦苷是地格达-4汤中君药肋柱花主要药效成分之一。前期研究发现，肋柱花是地格达-4味汤的君药。同时其他均资料显示，獐牙菜苦苷具有不同程度的利胆、保肝活性。本研究就从临床应用角度切入，即选择急性肝损伤大鼠为研究对象，分别灌胃地格达-4味汤和以肋柱花为主的三个药对的水煎液为研究药物，以血清中獐牙菜苦苷含量為评价指标，进行了研究。实验结果显示，含地格达-4味汤血清中獐牙菜苦苷含量在不同给药时间点均明显高于三对药物含量。由于獐牙菜苦苷是肋柱花乃至地格达-4味汤发挥利胆、保肝功效的最主要的物质基础。而且在一定程度上，有效成分（獐牙菜苦苷）含量与药物疗效呈正比关系。因此，通过本实验，可以初步判定地格达-4味汤组方具有合理性和科学性。进而为地格达-4味汤的进一步优化和研发提供参考和实验依据。
参考文献
［1］ 中华人民共和国卫生部药典委员会编.中华人民共和国卫生部药品标准·蒙药分册［M］.1998.103
［2］ 柳白乙拉，武绍新．中华本草蒙药卷［M］．上海科技技术出版社，2004:348.294.416.
［3］ 肖学风，乔晓莉．黄连解毒汤中栀子苷在大鼠体内药代动力学研究 ［J］．天津中医药，2008， 25（4）328-330
［4］ 高玉峰，巴根那等．蒙药地格达- 4味汤对D-GlaN-TAA所致小鼠急性肝损伤的实验研究［J］． 中国民族医药杂志，2009， 5（5）: 35~36
目的:通过拆方的方法探讨蒙药“肋柱花—4味汤”配伍规律。方法:将蒙药“肋柱花-4味汤”拆成肋柱花＋栀子、肋柱花＋瞿麦、肋柱花＋胡黄连等三个药对，分别给急性肝损伤模型大鼠灌胃给药，在不同时间点取血，分离血清，再以高效液相色谱（HPLC）法测定各血清样品中獐牙菜苦苷的含量。结果:含地格达-4味汤血清中獐牙菜苦苷含量在不同给药时间点均明显高于三对药物含量。结论:初步判定地格达-4味汤的组方具有合理性和科学性。
【中图分类号】R247.4 【文献标识码】B 【文章编号】1005-0515(2011)10-0474-01
1材料
1.1 药品与试剂:
地格达-4味汤，獐牙菜苦苷标准品，色谱甲醇，纯净水。
1.2 仪器:
高效液相色谱仪（SHIMADZU SPD-M10A LC-10AT），NA-5L氮气空气一体机，离心机，分析天平。
1.3 动物:
SD大鼠，SPF级，雄性，体重（250±10g），北京维通利华实验动物中心提供，合格证号SCXK（京）2002-2003。
2 方法
2.1 色谱条件:
色谱条件：Dimaonsil，C18柱（250mm×4.6mm, 5?m）；流动相：甲醇-水（0.1磷酸）（22:78）；流速：1ml/min；柱温：30℃；波长：238nm，进样量为10μL。
2.2 急性肝损伤大鼠模型的复制及血清样品的处理:
健康Wistar大鼠290只，随机分为5组，实验组按300mg/kg腹腔注入D-GlaN生理盐水溶液，禁食水24h后按0.8g/100g剂量灌胃给予实验药物，给药后于15、30、45、60、90、120、180、240、480 min分别腹主动脉取血，离心后得血清。精密吸取待测血清300μL,置2mL试管内,加入3倍体积甲醇,涡旋混匀2min,以12000r·min-1离心10min,吸取全部上清液,分别置于另一1mL试管内,氮气发生仪上吹干样品,加入100μL甲醇,涡旋混匀2min,再次12000r·min-1离心10min,取上清液按2.1项所述色谱条件下进样。
2.3 对照品溶液的配制: 精密称取獐芽菜苦苷标准品1.2mg，以甲醇溶解于10mL容量瓶中，定容至刻度，即得浓度为0.12Kg/L的獐芽菜苦苷对照品母液，吸取本母液1mL加甲醇定容至10mL容量瓶中，即得浓度为0.012Kg/L的獐芽菜苦苷对照品溶液。
3 结果
3.1线性关系的考察: 獐芽菜苦苷对照品母液中分别取100、200、400、800、1600、3200μL加甲醇定容至10mL容量瓶中，分别取50μL在37℃下氮气流吹干，以100μL甲醇复溶，微型旋涡混合仪混合2min，取上清液1.2项所述色谱条件下进样2.1项所述色谱条件下进样。以獐芽菜苦苷峰面积（Y）对獐芽菜苦苷浓度（X）作线性回归。獐芽菜苦苷标准曲线回归方程为Y=4677193X-3592, r=0.9996.线性范围为0.6—19.2mg/L。
3.2回归率及精密度实验: 獐芽菜苦苷对照品母液中取100、800、3200μL加甲醇定容至10mL容量瓶中，分别取50μL加250μL空白血清后加900μL甲醇后微型旋涡混合仪混合2 min,4000r/min离心10min，吸取上清液后在37℃下氮气流吹干，以100μL甲醇复溶，微型旋涡混合仪混合2min，2.1项所述色谱条件下进样。按峰面积计算回归率、日间及日内精密度。其低、中、高3个浓度的回归率分别为86.39+4.09，相对标准偏差（RSD）4.74%；98.92+3.09，RSD3.12%；89.21+5.38，6.03%（n=5）。日内精密度的RSD值分别为7.49%，5.80%，4.89%；日间精密度的RSD值分别为7.01%，4.98%，4.23%（n=5）。
3.3样品稳定性试验: 獐芽菜苦苷对照品母液中取100、800、3200μL加甲醇定容至10mL容量瓶中，分别取50μL加250μL空白血清后加900μL甲醇后微型旋涡混合仪混合2 min,4000r/min离心10min，吸取上清液后在37℃下氮气流吹干，以100μL甲醇复溶，微型旋涡混合仪混合2min取上清液，分别在0、6、12h于2.1项所述色谱条件下进样。结果表明獐芽菜苦苷在12h内稳定性良好，RSD值分别为10.79%，9.04%，11.38%（n=5）。
3.4各样品獐牙菜苦苷血药浓度—时间曲线图。含地格达-4味汤血清中獐牙菜苦苷含量在不同给药时间点均明显高于三对药物含量。
4 讨论
獐牙菜苦苷是地格达-4汤中君药肋柱花主要药效成分之一。前期研究发现，肋柱花是地格达-4味汤的君药。同时其他均资料显示，獐牙菜苦苷具有不同程度的利胆、保肝活性。本研究就从临床应用角度切入，即选择急性肝损伤大鼠为研究对象，分别灌胃地格达-4味汤和以肋柱花为主的三个药对的水煎液为研究药物，以血清中獐牙菜苦苷含量為评价指标，进行了研究。实验结果显示，含地格达-4味汤血清中獐牙菜苦苷含量在不同给药时间点均明显高于三对药物含量。由于獐牙菜苦苷是肋柱花乃至地格达-4味汤发挥利胆、保肝功效的最主要的物质基础。而且在一定程度上，有效成分（獐牙菜苦苷）含量与药物疗效呈正比关系。因此，通过本实验，可以初步判定地格达-4味汤组方具有合理性和科学性。进而为地格达-4味汤的进一步优化和研发提供参考和实验依据。
参考文献
［1］ 中华人民共和国卫生部药典委员会编.中华人民共和国卫生部药品标准·蒙药分册［M］.1998.103
［2］ 柳白乙拉，武绍新．中华本草蒙药卷［M］．上海科技技术出版社，2004:348.294.416.
［3］ 肖学风，乔晓莉．黄连解毒汤中栀子苷在大鼠体内药代动力学研究 ［J］．天津中医药，2008， 25（4）328-330
［4］ 高玉峰，巴根那等．蒙药地格达- 4味汤对D-GlaN-TAA所致小鼠急性肝损伤的实验研究［J］． 中国民族医药杂志，2009， 5（5）: 35~36