大鼠肝脏3Alpha—羟类固醇脱氢酶cDNA的克隆与表达

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目的 克隆大鼠肝脏3Alpha-羟类固醇脱氢酶(3α-HSD)cDNA,构建大肠杆菌表达质粒pET-30a/3α-HSD,并诱导表达含6个组氨酸标记的pET-30a/3α-HSD融合蛋白。方法 从大鼠肝脏组织中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增出大鼠3α-HSD cDNA,克隆于pGEM-T载体中,测序筛选后,将正确序列的3α-HSD基因Bam HI/Xho I片段定向插入融合基因表达载体pET-30a的相应克隆位点上,构建重组质粒pET-30a/3α-HSD,并转化大肠杆菌BL21-Gold9
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