【摘 要】
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目的 体外构建人PAX6 基因的shRNA慢病毒载体并鉴定.方法 实验研究.设计PAX6基因特异性siRNA靶点,构建PAX6 shRNA重组质粒,构建表达FLAG tag、PAX6以及红色荧光蛋白报告基因
【机 构】
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天津医科大学眼科中心,美国国立健康中心
【基金项目】
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国家自然科学基金资助 编号:30973272
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目的 体外构建人PAX6 基因的shRNA慢病毒载体并鉴定.方法 实验研究.设计PAX6基因特异性siRNA靶点,构建PAX6 shRNA重组质粒,构建表达FLAG tag、PAX6以及红色荧光蛋白报告基因的融合蛋白表达质粒,经Western Blot加以验证,使用293T细胞进行有效靶点的外源筛选.构建慢病毒pGCL-GFP载体,在293T细胞中包装病毒,将shRNA重组病毒感染人晶状体上皮细胞系(HLE-B3),检测B3细胞PAX6蛋白表达情况,从而筛选有效靶点.根据PAX6基因的4个候选RNAi靶序
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