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[摘 要]随着近年来的经济发展，城市空气质量不断下降，海洋环境污染日益严重。造成了各种病毒性和细菌性疾病的大规模肆虐，以及鱼类的严重绝种，给鱼类养殖业带来了巨大的损失。根据鱼类细胞系选择适合的生物检测进行对海洋中污染物的防治，建立有效快速的生物检测体系，是对当前环境污染以及对病毒的预防措施的重中之重。利用鱼类细胞系进行关于鱼类免疫系统的研究，深入研究鱼类的病毒理学，对预防鱼类绝种以及魚类疾病有着重要的意义。
[关键词]大黄鱼；细胞系；建立；研究
中图分类号：S917.4 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2015）07-0324-02
大黄鱼，又名为黄鱼，其肉嫩味鲜，营养丰富，是我国鱼类养殖业重点的捕捞对象。目前是我国的重点培养对象，但是因为受环境污、病毒入侵等等人为灾害的影响，需要建立细胞系来预防病毒入侵。同时还要开展环境检测，进行鱼类免疫系统的研究。但是遗憾的是至今都没有太大的成效，对鱼组织细胞系的研究一直都处在深入探索之中。
一、 鱼类细胞系的研究意义与价值
连续性的细胞系指的是在体外可以存活的细胞系。最初建立鱼类细胞系是为了鱼类病毒的研究，后来应用到了各个领域之中，比如鱼类免疫学、遗传学还有细胞毒理学等等各种科学研究领域。
细胞系是保留海洋动物资源的一个重要途径，建立完整的细胞系体系，对于我国海水动物建立完整的细胞库有着重要的意义，是保留海洋动物资源的重要的体系。要对细胞系进行开发研究，对海水动物养殖中的一系列领域能够进行深入研究，比如疫苗基因、灾害防治、细胞育种、动物克隆等领域，而且对于海水养殖中动物的病毒灾害防治也有着重要的意义。
鱼类细胞系可以用于病毒分离、病毒的疫苗研制等等一系列灾害防治当中。大大加快了我国海水养殖鱼类的病毒疫苗研究工作的进程，如果运用到医疗当中会带来巨大的经济效益，大力推动社会和经济的发展。鱼类细胞系可以制作成细胞模型，用来研究与鱼类病毒相关的研究，大力推动了我国对于疫苗基因的研究。还可以用于进行病毒环境的研究，检测环境中的污染物品。
二、 大黄鱼鳍细胞系的建立
将大黄鱼放入20～22摄氏度的高双抗消毒水中24小时之后，取出其鳍组织。用磷酸缓冲液洗两遍之后放入75%酒精中，大约一分钟之后，进行第二次漂洗。然后再用0.5%的透明质酸酶和0.2%的原酶进行混合，等到45分钟之后进行离心，将沉淀物收集。再用大约5%的胎牛血清DMEM/F12、LeibovitzL-15和DMEM培养液进行稀释，在22、25、28摄氏度中分别进行原代培养。对鳍组织的细胞迁出、细胞贴壁、细胞生长、细胞分裂等状况进行分析，研究出最适合培养的的温度。
对于处理好的鳍组织要在最适合的温度下进行原代培养，等到细胞变成了细胞单层，运用樊严俊的方法进行继代培养，每3～5天进行更换一次培养液。细胞到了第15代以后，就不必在培养液中加壳寡糖、硫酸软骨素等等。
按照樊廷俊的方法进行实施之后，将取出的第60代的大黄鱼鳍细胞接种到带24孔培养板中，每过12个小时就取出3个孔细胞进行计算，画出细胞生长曲线图，计算群体培养需要的时间。
对于染色体标本的制作依然按照樊廷俊的方法，取第60代鱼鳍细胞，放入秋水仙素中10个小时之后进行细胞收集。经过低渗、固定、滴片、干燥之后，开始用Giemsa进行染色，在显微镜下观察染色之后的染色体。
三、 大黄鱼鳍细胞系的研究
经过在透明质酸酶和原酶混合之后的黄鱼鳍组织，启动原代培养7天之后有大面积的细胞迁出，大约占了瓶底的15%。而且从生长到分裂的速度极快。在L-15和DMEM中培养的鱼鳍组织细胞迁出的很少，仅仅占瓶底面积的10%左右，而且从生长到分裂的速度极慢，如表1。
由此可以看出，在20%胎牛血清DMEM/F12培养液的环境下，更加适合大黄鱼鳍的体外细胞培养。所以大黄鱼鳍细胞培养最适合在DMEM/F12培养基中进行培养。
从20%胎牛血清DMEM/F12培养液中培养的结果能够知道，大黄鱼鳍在25摄氏度下培养7天之后迁出的细胞是最多的。而且从生长到的分裂的速度很快；经过观察看出在22摄氏度和28摄氏度中培养的大黄鱼鳍组织迁出的细胞很少，生长到分裂的速度极慢，如表2。
在细胞分裂的前一天是迟缓期，在1～3天的时候是对数期，到了3～4天为平台期，从4天之后就进入了衰退期。5天内形成一个生长周期。进过认真计算，第60代鱼鳍细胞进行群体倍增的时间大约要50.96小时，这样能够看出其生长分裂进行的十分快速。
结语：
近年来海洋污染的加剧，导致各种病毒性疾病大规模侵入，导致鱼类资源的绝种，给海水鱼类养殖业带来了经济上的极大损失。利用鱼类细胞系进行科学的生物检测，能够快速的找到污染物。同时要建立完整地生物检测系统，这对当前的污染物的检测，病毒的防护，以及鱼类疾病的预防有着重要的影响。也为鱼类养殖业做出了极大的贡献。同时由于利用鱼类细胞进行细胞的基因转染，对于研究鱼类基因的研究工作，培育鱼类新品种方面有着巨大的价值。虽然目前还没有关于大黄鱼细胞体系建立的消息，而且关于大黄鱼细胞系的鱼类病毒理学的研究也没有取得显著成果，但是对于鱼类细胞体系的研究一直都是鱼类养殖业研究中心的重点研究对象。
参考文献
[1]孙爱. 大黄鱼（Pseudosciaena crocea）三种组织细胞系的建立、鉴定及其应用的初步研究[D].中国海洋大学，2010.
[2]樊廷俊，孙爱，杨秀霞，姜国建，徐晓辉，郭雪阳. 大黄鱼鳍细胞系的建立及久效磷对其毒性作用的研究[J]. 中国海洋大学学报（自然科学版），2010（12）.
[3]庄道华，韩坤煌，张子平，姜永华，王艺磊. 大黄鱼三种细胞系的建立及其相关特性分析[A]. 中国水产学会.2012年中国水产学会学术年会论文摘要集[C].中国水产学会，2012（01）.
[4]王晓清. 大黄鱼DNA分子标记技术及其在遗传育种中应用研究[D].湖南农业大学，2007.
[5]祝东梅. 团头鲂三种细胞系的建立、鉴定及其初步应用[D].华中农业大学，2013.
[关键词]大黄鱼；细胞系；建立；研究
中图分类号：S917.4 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2015）07-0324-02
大黄鱼，又名为黄鱼，其肉嫩味鲜，营养丰富，是我国鱼类养殖业重点的捕捞对象。目前是我国的重点培养对象，但是因为受环境污、病毒入侵等等人为灾害的影响，需要建立细胞系来预防病毒入侵。同时还要开展环境检测，进行鱼类免疫系统的研究。但是遗憾的是至今都没有太大的成效，对鱼组织细胞系的研究一直都处在深入探索之中。
一、 鱼类细胞系的研究意义与价值
连续性的细胞系指的是在体外可以存活的细胞系。最初建立鱼类细胞系是为了鱼类病毒的研究，后来应用到了各个领域之中，比如鱼类免疫学、遗传学还有细胞毒理学等等各种科学研究领域。
细胞系是保留海洋动物资源的一个重要途径，建立完整的细胞系体系，对于我国海水动物建立完整的细胞库有着重要的意义，是保留海洋动物资源的重要的体系。要对细胞系进行开发研究，对海水动物养殖中的一系列领域能够进行深入研究，比如疫苗基因、灾害防治、细胞育种、动物克隆等领域，而且对于海水养殖中动物的病毒灾害防治也有着重要的意义。
鱼类细胞系可以用于病毒分离、病毒的疫苗研制等等一系列灾害防治当中。大大加快了我国海水养殖鱼类的病毒疫苗研究工作的进程，如果运用到医疗当中会带来巨大的经济效益，大力推动社会和经济的发展。鱼类细胞系可以制作成细胞模型，用来研究与鱼类病毒相关的研究，大力推动了我国对于疫苗基因的研究。还可以用于进行病毒环境的研究，检测环境中的污染物品。
二、 大黄鱼鳍细胞系的建立
将大黄鱼放入20～22摄氏度的高双抗消毒水中24小时之后，取出其鳍组织。用磷酸缓冲液洗两遍之后放入75%酒精中，大约一分钟之后，进行第二次漂洗。然后再用0.5%的透明质酸酶和0.2%的原酶进行混合，等到45分钟之后进行离心，将沉淀物收集。再用大约5%的胎牛血清DMEM/F12、LeibovitzL-15和DMEM培养液进行稀释，在22、25、28摄氏度中分别进行原代培养。对鳍组织的细胞迁出、细胞贴壁、细胞生长、细胞分裂等状况进行分析，研究出最适合培养的的温度。
对于处理好的鳍组织要在最适合的温度下进行原代培养，等到细胞变成了细胞单层，运用樊严俊的方法进行继代培养，每3～5天进行更换一次培养液。细胞到了第15代以后，就不必在培养液中加壳寡糖、硫酸软骨素等等。
按照樊廷俊的方法进行实施之后，将取出的第60代的大黄鱼鳍细胞接种到带24孔培养板中，每过12个小时就取出3个孔细胞进行计算，画出细胞生长曲线图，计算群体培养需要的时间。
对于染色体标本的制作依然按照樊廷俊的方法，取第60代鱼鳍细胞，放入秋水仙素中10个小时之后进行细胞收集。经过低渗、固定、滴片、干燥之后，开始用Giemsa进行染色，在显微镜下观察染色之后的染色体。
三、 大黄鱼鳍细胞系的研究
经过在透明质酸酶和原酶混合之后的黄鱼鳍组织，启动原代培养7天之后有大面积的细胞迁出，大约占了瓶底的15%。而且从生长到分裂的速度极快。在L-15和DMEM中培养的鱼鳍组织细胞迁出的很少，仅仅占瓶底面积的10%左右，而且从生长到分裂的速度极慢，如表1。
由此可以看出，在20%胎牛血清DMEM/F12培养液的环境下，更加适合大黄鱼鳍的体外细胞培养。所以大黄鱼鳍细胞培养最适合在DMEM/F12培养基中进行培养。
从20%胎牛血清DMEM/F12培养液中培养的结果能够知道，大黄鱼鳍在25摄氏度下培养7天之后迁出的细胞是最多的。而且从生长到的分裂的速度很快；经过观察看出在22摄氏度和28摄氏度中培养的大黄鱼鳍组织迁出的细胞很少，生长到分裂的速度极慢，如表2。
在细胞分裂的前一天是迟缓期，在1～3天的时候是对数期，到了3～4天为平台期，从4天之后就进入了衰退期。5天内形成一个生长周期。进过认真计算，第60代鱼鳍细胞进行群体倍增的时间大约要50.96小时，这样能够看出其生长分裂进行的十分快速。
结语：
近年来海洋污染的加剧，导致各种病毒性疾病大规模侵入，导致鱼类资源的绝种，给海水鱼类养殖业带来了经济上的极大损失。利用鱼类细胞系进行科学的生物检测，能够快速的找到污染物。同时要建立完整地生物检测系统，这对当前的污染物的检测，病毒的防护，以及鱼类疾病的预防有着重要的影响。也为鱼类养殖业做出了极大的贡献。同时由于利用鱼类细胞进行细胞的基因转染，对于研究鱼类基因的研究工作，培育鱼类新品种方面有着巨大的价值。虽然目前还没有关于大黄鱼细胞体系建立的消息，而且关于大黄鱼细胞系的鱼类病毒理学的研究也没有取得显著成果，但是对于鱼类细胞体系的研究一直都是鱼类养殖业研究中心的重点研究对象。
参考文献
[1]孙爱. 大黄鱼（Pseudosciaena crocea）三种组织细胞系的建立、鉴定及其应用的初步研究[D].中国海洋大学，2010.
[2]樊廷俊，孙爱，杨秀霞，姜国建，徐晓辉，郭雪阳. 大黄鱼鳍细胞系的建立及久效磷对其毒性作用的研究[J]. 中国海洋大学学报（自然科学版），2010（12）.
[3]庄道华，韩坤煌，张子平，姜永华，王艺磊. 大黄鱼三种细胞系的建立及其相关特性分析[A]. 中国水产学会.2012年中国水产学会学术年会论文摘要集[C].中国水产学会，2012（01）.
[4]王晓清. 大黄鱼DNA分子标记技术及其在遗传育种中应用研究[D].湖南农业大学，2007.
[5]祝东梅. 团头鲂三种细胞系的建立、鉴定及其初步应用[D].华中农业大学，2013.