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目的
建立一种快速灵敏准确的分子检测方法用来检测临床分离菌株中的mcr-1基因。
方法根据mcr-1基因的序列设计一对特异性引物和一条TaqMan探针，同时构建含有mcr-1基因片段的重组质粒作为阳性标准品，采用TaqMan探针荧光定量PCR方法检测耐药基因mcr-1，并对方法的敏感性、重复性和特异性进行评价。
结果TaqMan探针荧光定量PCR结果显示起始模板量与Ct值之间存在良好的线性关系(R2>0.999)，检出下限为10拷贝/μl，比常规PCR敏感性高100倍；特异性检测显示只有含mcr-1基因的菌株结果为阳性，其余菌株为阴性；组内及组间重复性试验的变异系数均小于1%。利用所建立的方法对150株临床分离的耐药菌株进行检测，检测到2株菌株携带mcr-1耐药基因，2株菌株鉴定均为大肠杆菌。
结论建立的TaqMan探针荧光定量PCR检测耐药基因mcr-1的方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的优点，可用于临床检验上特异性检测携带mcr-1基因的临床耐药菌株，为临床药物治疗提供更好的依据。