论文部分内容阅读
目的
原核表达小鼠Flt3配体，分析其在不同亚型DCs体外诱导中的应用潜能，为不同亚型DCs的深入研究提供实验资料。
方法PCR扩增flt3l基因，构建pCold-flt3l质粒，转化大肠埃希菌BL21(DE3)诱导表达并纯化。重组蛋白进行SDS-PAGE和Western blot分析，并用于小鼠骨髓源DCs的诱导制备，流式细胞术分析不同DC亚型相关分子标志以及CD40、CD80、CD86和MHCⅡ的表达，同时ELISA测定IL-12和IFN-α的表达。
结果SDS-PAGE结果表明目的蛋白成功表达，纯化后纯度达93.3%，Western blot结果表明其具备良好的免疫反应性。同时，该蛋白能诱导小鼠骨髓细胞分化为较高比例(约60%)的DCs，且包含cDCs(CD11c＋CD45RA－)和pDCs(CD11c＋CD45RA＋)亚型；LPS刺激后2种DC亚型均上调CD40、CD80、CD86和MHCⅡ的表达，且分泌较高水平的IL-12和IFN-α。
结论本研究成功获得重组小鼠Flt3配体蛋白，可用于制备具有良好生物学功能的cDCs和pDCs亚型，为下一步研究提供基础材料。