基于易错PCR技术的红酵母D-氨基酸氧化酶的定向进化

来源 :工业微生物 | 被引量 : 0次 | 上传用户：ronalito

【摘要】

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采用易错PCR技术对来源于红酵母Rhodotorula gracilis的D-氨基酸氧化酶基因（Rg-DAAO）进行突变，构建并优化了突变株文库；结合48深孔板的高通量筛选方法，获得突变株M3217，其Vmax相对

【作者】

：

孙晨肖慈英郭美锦储炬张嗣良

【机构】

：

华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室

【出处】

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工业微生物

【发表日期】

：

2014年4期

【关键词】

：

易错PCR 定向进化高通量筛选红酵母D-氨基酸氧化酶 error-prone PCR directed evolution high-throughput

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采用易错PCR技术对来源于红酵母Rhodotorula gracilis的D-氨基酸氧化酶基因（Rg-DAAO）进行突变，构建并优化了突变株文库；结合48深孔板的高通量筛选方法，获得突变株M3217，其Vmax相对于野生型提高了16．8％。对测序结果进行分析，发现突变酶基因序列中有5处点突变，其中3处发生了氨基酸置换，分别为：D242V／Q253IL／D304V。利用Swiss—Model对突变株M3217进行三维结构模拟，结果显示所有突变位点都不在催化活性中心的附近，特别是V304的位置在连接F5和F6

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