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建立了动物源性食品中65种兽药残留的快速提取、净化及超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)检测方法。采用乙腈-甲酸溶液为提取溶剂。通过固相萃取柱(ProElut PLS-A)对提取液进行净化,采用多反应监测模式检测。65种目标化合物呈现良好的线性关系,定量限为0.1~1.6μg/kg,大部分兽药残留的回收率在67.1%~100.2%之间,相对标准偏差小于7.8%(n=3)。建立的方法适用于动物源性食品中65种兽药残留快速检测分析。