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摘要：通过对EM菌与3种不同微藻的共同培养，在营养盐丰富的水体中，以两种方式培养的EM菌1∶400～1∶80的体积比添加到藻液中，对金藻、硅藻、绿藻的生长都有一定的促进作用，其中对金藻及硅藻生长的促进作用更加显著，生长率提高20%～50%，最终细胞密度有所提高。
关键词：EM菌；小新月菱形藻；小球藻；球等鞭金藻3011；生长
水质调控是海水养殖技术的重要组成部分，只有保持良好的水质才能从根本上减少水产动物疾病的发生。水生生态系统中藻类与细菌的关系十分密切，二者在水体物质循环中起着重要的作用。通过细菌、藻类来分解、吸收或摄食水体中的营养物质，降低有机物污染；微生物降解有机物，使其转化为无机营养盐，供给藻类生长。微生物和藻类之间就有可能形成协同作用，从而改善养殖水质。近年来人们正致力于藻类-微生物联合净化养殖水质的研究，以期建立经济实用的微藻和微生物综合调控养殖水环境的模式。
EM是由多种有益微生物组成的活菌制剂，在水产养殖上作水质净化、改良剂以及饵料拌合剂，以此净化水质及增强养殖品种的免疫力，从而提高产量和效益。刘淇[1]在南美白对虾养殖中使用复合型活菌生物净水剂，实验池水体透明度比对照池高39.35%，BOD低24.59%，NH4+-N含量低33.10%。张庆等[2]研究证明，复合微生物能有效增加水体中的溶解氧，降低水体中氨氮、亚硝酸氮等营养盐的含量并保持水体中稳定的藻相。张玲华等[3]研究表明复合微生物制剂能有效调节养殖池藻群环境，有害藻类受到抑制；有效地降解养殖池水体中的有机物，抑制氨氮、COD、TOC的升高，降低亚硝酸盐的浓度。
藻类通过光合作用释放氧气供给好氧异养微生物，而好氧异养微生物对有机污染物进行氧化分解，产生CO2和无机氮、磷化合物又能给藻类提供光合作用所需碳源和营养，如此循环，称为“藻菌共生”。Gomez GilB等[4]报道将Vibrio alginolyticus C7b菌和微藻Chaetoceros muelleri共同培养，Vibrio alginolyticus C7b菌迅速增长并在9 d的成熟过程中保持稳定的高浓度。而Vibrio alginolyticus C7b菌单独培养时，1 d后数量即开始减少。由此可见，将藻类对污水中氮磷和有机物的摄取去除功能与细菌强大的污染降解能力有效结合起来，在养殖环境中可以让它们更好地发挥作用。目前，在“藻菌共生”理论基础上建立的“菌藻共生系统”已在城市污水处理上显示了巨大的优势，而在水产养殖废水净化方面的研究和报道甚少，需要进一步研究。而在人类环保健康意识的增强下，微生物水质净化剂以及“菌藻共生系统”在水产养殖中的应用必将有着更为广泛的前景。
本文使用了沧州某有限公司提供的一种培藻肥水型EM菌，利用此EM菌的菌液与微藻共同培养，研究EM菌对3种微藻生长状态的影响，以期为此EM菌应用于水产养殖生产提供理论依据。
1材料与方法
1.1实验材料
EM菌沧州某有限公司提供的一种培藻肥水型EM菌，主要由乳酸菌、硝化菌、芽孢杆菌、光合菌、酵母菌等组成。
小新月菱形藻、小球藻、球等鞭金藻3011。
1.2实验方法
EM菌培养：①取EM菌10 g+红糖20 g添加到1 L消毒海水中（海水中加f培养母液），放于30 ℃条件下发酵4～5 d；②5 g EM菌+5 g红糖+10 g面粉+10 g玉米面+5 g豆面添加到500 mL消毒海水中，于30 ℃下培养至出现浓厚的酒香味。
微藻培养：两种方式培养的EM菌分别加入到200 mL相同藻密度的小新月菱形、3011、小球藻中，分别添加0.5 mL、2.5 mL或5 mL EM菌液，以f培养基培养的藻液为对照，每个处理组设置3个平行。
2实验结果
2.1除对照组外，其他处理组均未添加任何营养盐（小新月菱形）
实验结果如图1，添加2.5 mL红糖培养的EM菌的处理组延缓期较短，培养第二天达到指数生长期，且达到的细胞密度最大（除对照组外），但与对照组相比较生长期较短，镜检观察细胞完整度较好，视野中的杂质较少。添加0.5 mL淀粉等培养的EM菌的处理组也可达到较大的细胞密度，但是镜检发现杂质较多，细胞有破碎。
图1在未添加任何营养盐的
海水中添加EM菌培养小新月菱形藻
2.2所有处理组都先添加f培养基，然后再加入不同量的EM菌
图2为在已添加f培养基的海水中添加EM菌培养小新月菱形藻，图中可以看出，以红糖或面粉等培养的EM菌0.5 mL加入到200 mL小新月菱形藻，在整个生长周期中都有显著的促进作用，其生长率显著高于对照组。
图2在已添加f培养基的海水中
添加EM菌培养小新月菱形
图3为在已添加f培养基的海水中添加EM菌培养3011，图中可以看出，以面粉等培养的EM菌5 mL加入到200 mL3011藻液中，在整个生长周期中有显著促进作用，生长率及细胞密度显著高于其他各组。另外以红糖或面粉等培养的EM菌2.5 mL加入到200 mL 3011藻液中，其生长率及细胞密度也显著地高于对照组。
图3在已添加f培养基的海水中
添加EM菌培养3011
图4在已添加f培养基的海水中
添加EM菌培养小球藻
图4为在已添加f培养基的海水中添加EM菌培养小球藻，图中可以看出，EM菌0.5或2.5 mL加入至200 mL藻液中也有一定的促进作用，但是效果不显著。
3小结与讨论
从实验中可以看出，在营养盐丰富的水体中，以两种方式培养的EM菌1∶400～1∶80的体积比添加到藻液中，对金藻、硅藻、绿藻的生长都有一定的促进作用，其中对金藻及硅藻生长的促进作用更加显著，生长率提高20%～50%，最终细胞密度有所提高。因此，建议在培养微藻时，在正常添加营养盐的情况下，以1∶400～1∶80的体积比将EM菌液添加到藻液中，在海参池等营养丰富的水体中也可适量添加此EM菌，但必须提前观察水体中浮游生物的组成种类，以免造成敌害生物的大量繁殖。 利用菌藻联合调控养殖水质，可以改善池塘微生态结构，既能保持水体透明度，又能为养殖生物提供好较好的天然饵料，是实施生态养殖的有效途径之一。陈海敏[5]探索了光合细菌和小球藻联合处理调控养殖水体水质情况，实验结果表明，光合细菌和小球藻能很好地去除水体的氮磷。沈南南等[6]研究结果表明，小球藻和芽孢杆菌联合处理组对水质的调控效果明显优于仅添加芽孢杆菌组或小球藻组。黄翔鹄等[7]研究结果表明人工引入波吉卵囊藻和微绿球藻于凡纳滨对虾养殖环境中，水质能够得到显著的改善。
本实验在实验室条件下进行，具有恒定的温度、光照等环境因素，而且未向水体中补充外源有机物和无机盐，因此随着培养时间的延长，养殖水体中营养物质迅速消耗，溶解氧、二氧化碳的量也在不断变化，这些因素共同作用于益生菌和微藻的生长。但是外界环境中的水体，温度、光照等不恒定，且有外源营养盐的补充，与实验室环境完全不同。因此，EM菌对三种微藻的影响机制非常复杂，有待进一步研究。
参考文献：
[1] 刘淇.科新牌复合型活性生物净水剂在南美白对虾养殖中的应用研究[J].中国水产，2001（6）：82-83
[2]张庆，李卓佳，陈康德，等.复合微生物对养殖水体生态因子的影响.上海水产大学学报，1999，8（1）：4-7
[3]张玲华，田兴山，邝哲师，等.复合微生物制剂在改善水产养殖微生态环境中的应用.广东饲料，2004，13（1）：22-23
[4]Gomez-Gil B，Roque A，Velascc-Blanco G.Culture of Vibrio algi nolyticus C7b，apotential probiotic bacterium，with the microalgae Chaetocer os mulelleri[J].Aqua，2002，211：43-48
[5]陈海敏，陈声明.工厂化水产养殖废水菌藻联合处理模式研究[J].浙江树人大学学报，2002，2（4）：64-67
[6]沈南南，李纯厚，贾晓平，等.小球藻与芽孢杆菌对对虾养殖水质调控作用的研究[J].海洋水产研究，2008，29（2）：48-52
[7]黄翔鹄，李长玲，郑莲，等.固定化微藻对虾池弧菌数量动态的影响[J].水生生物学报，2005，29（6）：684-688
（收稿日期：2015-10-27；修回日期：2015-11-04）
关键词：EM菌；小新月菱形藻；小球藻；球等鞭金藻3011；生长
水质调控是海水养殖技术的重要组成部分，只有保持良好的水质才能从根本上减少水产动物疾病的发生。水生生态系统中藻类与细菌的关系十分密切，二者在水体物质循环中起着重要的作用。通过细菌、藻类来分解、吸收或摄食水体中的营养物质，降低有机物污染；微生物降解有机物，使其转化为无机营养盐，供给藻类生长。微生物和藻类之间就有可能形成协同作用，从而改善养殖水质。近年来人们正致力于藻类-微生物联合净化养殖水质的研究，以期建立经济实用的微藻和微生物综合调控养殖水环境的模式。
EM是由多种有益微生物组成的活菌制剂，在水产养殖上作水质净化、改良剂以及饵料拌合剂，以此净化水质及增强养殖品种的免疫力，从而提高产量和效益。刘淇[1]在南美白对虾养殖中使用复合型活菌生物净水剂，实验池水体透明度比对照池高39.35%，BOD低24.59%，NH4+-N含量低33.10%。张庆等[2]研究证明，复合微生物能有效增加水体中的溶解氧，降低水体中氨氮、亚硝酸氮等营养盐的含量并保持水体中稳定的藻相。张玲华等[3]研究表明复合微生物制剂能有效调节养殖池藻群环境，有害藻类受到抑制；有效地降解养殖池水体中的有机物，抑制氨氮、COD、TOC的升高，降低亚硝酸盐的浓度。
藻类通过光合作用释放氧气供给好氧异养微生物，而好氧异养微生物对有机污染物进行氧化分解，产生CO2和无机氮、磷化合物又能给藻类提供光合作用所需碳源和营养，如此循环，称为“藻菌共生”。Gomez GilB等[4]报道将Vibrio alginolyticus C7b菌和微藻Chaetoceros muelleri共同培养，Vibrio alginolyticus C7b菌迅速增长并在9 d的成熟过程中保持稳定的高浓度。而Vibrio alginolyticus C7b菌单独培养时，1 d后数量即开始减少。由此可见，将藻类对污水中氮磷和有机物的摄取去除功能与细菌强大的污染降解能力有效结合起来，在养殖环境中可以让它们更好地发挥作用。目前，在“藻菌共生”理论基础上建立的“菌藻共生系统”已在城市污水处理上显示了巨大的优势，而在水产养殖废水净化方面的研究和报道甚少，需要进一步研究。而在人类环保健康意识的增强下，微生物水质净化剂以及“菌藻共生系统”在水产养殖中的应用必将有着更为广泛的前景。
本文使用了沧州某有限公司提供的一种培藻肥水型EM菌，利用此EM菌的菌液与微藻共同培养，研究EM菌对3种微藻生长状态的影响，以期为此EM菌应用于水产养殖生产提供理论依据。
1材料与方法
1.1实验材料
EM菌沧州某有限公司提供的一种培藻肥水型EM菌，主要由乳酸菌、硝化菌、芽孢杆菌、光合菌、酵母菌等组成。
小新月菱形藻、小球藻、球等鞭金藻3011。
1.2实验方法
EM菌培养：①取EM菌10 g+红糖20 g添加到1 L消毒海水中（海水中加f培养母液），放于30 ℃条件下发酵4～5 d；②5 g EM菌+5 g红糖+10 g面粉+10 g玉米面+5 g豆面添加到500 mL消毒海水中，于30 ℃下培养至出现浓厚的酒香味。
微藻培养：两种方式培养的EM菌分别加入到200 mL相同藻密度的小新月菱形、3011、小球藻中，分别添加0.5 mL、2.5 mL或5 mL EM菌液，以f培养基培养的藻液为对照，每个处理组设置3个平行。
2实验结果
2.1除对照组外，其他处理组均未添加任何营养盐（小新月菱形）
实验结果如图1，添加2.5 mL红糖培养的EM菌的处理组延缓期较短，培养第二天达到指数生长期，且达到的细胞密度最大（除对照组外），但与对照组相比较生长期较短，镜检观察细胞完整度较好，视野中的杂质较少。添加0.5 mL淀粉等培养的EM菌的处理组也可达到较大的细胞密度，但是镜检发现杂质较多，细胞有破碎。
图1在未添加任何营养盐的
海水中添加EM菌培养小新月菱形藻
2.2所有处理组都先添加f培养基，然后再加入不同量的EM菌
图2为在已添加f培养基的海水中添加EM菌培养小新月菱形藻，图中可以看出，以红糖或面粉等培养的EM菌0.5 mL加入到200 mL小新月菱形藻，在整个生长周期中都有显著的促进作用，其生长率显著高于对照组。
图2在已添加f培养基的海水中
添加EM菌培养小新月菱形
图3为在已添加f培养基的海水中添加EM菌培养3011，图中可以看出，以面粉等培养的EM菌5 mL加入到200 mL3011藻液中，在整个生长周期中有显著促进作用，生长率及细胞密度显著高于其他各组。另外以红糖或面粉等培养的EM菌2.5 mL加入到200 mL 3011藻液中，其生长率及细胞密度也显著地高于对照组。
图3在已添加f培养基的海水中
添加EM菌培养3011
图4在已添加f培养基的海水中
添加EM菌培养小球藻
图4为在已添加f培养基的海水中添加EM菌培养小球藻，图中可以看出，EM菌0.5或2.5 mL加入至200 mL藻液中也有一定的促进作用，但是效果不显著。
3小结与讨论
从实验中可以看出，在营养盐丰富的水体中，以两种方式培养的EM菌1∶400～1∶80的体积比添加到藻液中，对金藻、硅藻、绿藻的生长都有一定的促进作用，其中对金藻及硅藻生长的促进作用更加显著，生长率提高20%～50%，最终细胞密度有所提高。因此，建议在培养微藻时，在正常添加营养盐的情况下，以1∶400～1∶80的体积比将EM菌液添加到藻液中，在海参池等营养丰富的水体中也可适量添加此EM菌，但必须提前观察水体中浮游生物的组成种类，以免造成敌害生物的大量繁殖。 利用菌藻联合调控养殖水质，可以改善池塘微生态结构，既能保持水体透明度，又能为养殖生物提供好较好的天然饵料，是实施生态养殖的有效途径之一。陈海敏[5]探索了光合细菌和小球藻联合处理调控养殖水体水质情况，实验结果表明，光合细菌和小球藻能很好地去除水体的氮磷。沈南南等[6]研究结果表明，小球藻和芽孢杆菌联合处理组对水质的调控效果明显优于仅添加芽孢杆菌组或小球藻组。黄翔鹄等[7]研究结果表明人工引入波吉卵囊藻和微绿球藻于凡纳滨对虾养殖环境中，水质能够得到显著的改善。
本实验在实验室条件下进行，具有恒定的温度、光照等环境因素，而且未向水体中补充外源有机物和无机盐，因此随着培养时间的延长，养殖水体中营养物质迅速消耗，溶解氧、二氧化碳的量也在不断变化，这些因素共同作用于益生菌和微藻的生长。但是外界环境中的水体，温度、光照等不恒定，且有外源营养盐的补充，与实验室环境完全不同。因此，EM菌对三种微藻的影响机制非常复杂，有待进一步研究。
参考文献：
[1] 刘淇.科新牌复合型活性生物净水剂在南美白对虾养殖中的应用研究[J].中国水产，2001（6）：82-83
[2]张庆，李卓佳，陈康德，等.复合微生物对养殖水体生态因子的影响.上海水产大学学报，1999，8（1）：4-7
[3]张玲华，田兴山，邝哲师，等.复合微生物制剂在改善水产养殖微生态环境中的应用.广东饲料，2004，13（1）：22-23
[4]Gomez-Gil B，Roque A，Velascc-Blanco G.Culture of Vibrio algi nolyticus C7b，apotential probiotic bacterium，with the microalgae Chaetocer os mulelleri[J].Aqua，2002，211：43-48
[5]陈海敏，陈声明.工厂化水产养殖废水菌藻联合处理模式研究[J].浙江树人大学学报，2002，2（4）：64-67
[6]沈南南，李纯厚，贾晓平，等.小球藻与芽孢杆菌对对虾养殖水质调控作用的研究[J].海洋水产研究，2008，29（2）：48-52
[7]黄翔鹄，李长玲，郑莲，等.固定化微藻对虾池弧菌数量动态的影响[J].水生生物学报，2005，29（6）：684-688
（收稿日期：2015-10-27；修回日期：2015-11-04）