甘露醇在冷冻解冻去甘油红细胞中应用的研究

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目的探讨在红细胞冷冻前、解冻洗涤过程中添加适宜浓度大分子细胞膜保护剂-甘露醇,提高冷冻解冻去甘油红细胞RBC回收率、降低甘油残存量的可行性。方法选取20袋6 d内制备的400 mL去白细胞悬浮红细胞,离心去浆后等量分装(各100 mL)作为实验组和对照组,其中实验组在160 mL甘油化试剂、解冻第1次洗涤80mL 9%NaCl溶液、第2次洗涤200 mL 0.9%NaCl溶液中分别加入终浓度为1.6%、1%、0.2%的甘露醇,通过统计学分析比较实验组与对照组RBC回收率、甘油残存量、红细胞渗透脆性是否有显著性差异,并通过检测冷冻红细胞解冻洗涤过程中游离血红蛋白含量,确定提高冷冻解冻去甘油红细胞RBC回收率的关键点。结果实验组RBC回收率显著高于对照组(t=20.727,P<0.05)、甘油残存量显著低于对照组(t=-4.611,P<0.05)、红细胞渗透脆性与对照组差异无统计学意义(t=0.317,P>0.05),冷冻红细胞解冻第1次洗涤后实验组血浆游离血红蛋白含量低于对照组(t=-22.326,P<0.05),其余洗涤步骤实验组与对照组血浆游离血红蛋白含量差异无统计学意义(P>0.05)。结论冷冻解冻去甘油红细胞在160 mL甘油化试剂、解冻第1次洗涤80 mL 9%NaCl溶液、第2次洗涤200 mL0.9%NaCl溶液中分别加入终浓度为1.6%、1%、0.2%的甘露醇,红细胞回收率显著提高、甘油残存量显著降低、红细胞渗透脆性无显著性差异,冷冻解冻去甘油红细胞RBC回收率提高的关键点为解冻第一次洗涤过程。 Objective To explore the feasibility of adding appropriate concentration of macromolecular protective agent - mannitol before thawing and thawing, to improve the RBC recovery of frozen-thawed glycerol red cells and reduce the residual glycerol. Methods 400 mL of leukocyte suspension erythrocytes prepared within 20 days in 20 bags were selected and centrifuged to equal volume (100 mL each) for desalting as the experimental group and the control group. The experimental group was treated with 160 mL of glycerinated reagent and thawed for the first time After washing 80mL 9% NaCl solution and washing 200mL 0.9% NaCl solution for the second time, the final concentration of mannitol was 1.6%, 1% and 0.2%, respectively. The recovery of RBC, glycerol Residual volume and erythrocyte infiltration fragility, and the key point to improve RBC recovery of frozen-thawed glycerol red cells by determining the content of free hemoglobin during thawing and thawing of frozen red blood cells. Results The recovery rate of RBC in the experimental group was significantly higher than that of the control group (t = 20.727, P <0.05), and the residual glycerol was significantly lower than that of the control group (t = -4.611, P <0.05) (T = -22.326, P <0.05). The content of plasma free hemoglobin in the experimental group was lower than that in the control group (t = -22.326, P <0.05) after the first washing of thawed red blood cells. There was no significant difference in hemoglobin content (P> 0.05). CONCLUSIONS: Frozen thawing of glycerol red cells in 160 mL of glycerol reagent, thawed 80 mL of 9% NaCl solution for the first time and 200 mL of 0.9% NaCl solution for the second time were respectively added to a final concentration of 1.6%, 1%, 0.2% Of mannitol, the recovery of erythrocytes was significantly increased, the residual glycerol was significantly reduced, there was no significant difference in erythrocyte osmotic fragility. The key point to improve the RBC recovery of frozen-thawed glycerol red blood cells was the thawing first washing process.
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