研究miR-325通过调控转铁蛋白受体(TFRC)基因在胶质瘤细胞中的表达对胶质瘤细胞进程的影响和分子机理。
方法(1)收集天津医科大学总医院神经外科自2015年1月至2018年1月手术切除并经病理证实的脑胶质瘤标本35例，以患者癌旁正常组织作为对照。反转录-定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测肿瘤组织和癌旁组织miR-325、TFRC mRNA的表达，比较不同临床特征患者肿瘤组织miR-325的表达及miR-325低表达、高表达患者的生存曲线。(2)RT-qPCR检测体外培养的HA、U251和U87细胞miR-325的表达；荧光素酶活性实验检测U251和U87细胞miR-325与靶基因TFRC的调控关系；将U251、U87细胞分为miR-325模拟物组、无义序列组，分别转染miR-325模拟物和无义序列，48 h后分别应用RT-qPCR、Western blotting检测细胞TFRC mRNA和蛋白的表达；将U251、U87细胞分为对照小干扰RNA(siRNA)+无义抑制物组、TFRC干扰RNA(siTFRC)+无义抑制物组、siTFRC+miR-325抑制物组，分别转染对应物质后48 h应用Western blotting检测细胞TFRC蛋白的表达。CCK-8实验检测细胞的增殖，Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力；将U251、U87细胞分为pcDNA3.1空载体+无义序列组、TFRC pcDNA3.1+无义序列组、TFRC pcDNA3.1+miR-325模拟物组，分别转染对应物质后48 h应用Western blotting检测细胞TFRC蛋白的表达，CCK-8实验检测细胞的增殖，Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力。
结果(1)与癌旁组织比较，患者肿瘤组织miR-325的表达下降，TFRC mRNA的表达上升，差异均有统计学意义(P<0.05)；肿瘤组织TFRC mRNA、miR-325的表达呈负相关关系(r=-0.363，P=0.001)。与Karnofsky功能状态评分≥80分患者比较，<80分患者肿瘤组织miR-325的表达降低；与WHO分级Ⅰ~Ⅱ级胶质瘤比较，Ⅲ~Ⅳ级胶质瘤组织miR-325的表达降低；差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-325低表达患者的生存率低于miR-325高表达患者，差异有统计学意义(P<0.05)。(2)与HA细胞比较，U87、U251细胞miR-325的表达下调，差异有统计学意义(P<0.05)；在TFRC野生型(WT)表达载体转染的细胞中，miR-325模拟物组细胞荧光素酶活性低于无义序列组，而miR-325抑制物组细胞荧光素酶活性高于无义抑制物组，差异有统计学意义(P<0.05)；与无义序列组比较，miR-325模拟物组U87和U251细胞TFRC mRNA和蛋白的表达均下降，差异有统计学意义(P< 0.05)。与对照siRNA+无义抑制物组比较，siTFRC+无义抑制物组细胞TFRC蛋白的表达、吸光度值、侵袭细胞数降低；与siTFRC+无义抑制物组比较，siTFRC+miR-325抑制物组细胞TFRC蛋白的表达、吸光度值、侵袭细胞数增高，差异均有统计学意义(P<0.05)。与pcDNA3.1空载体+无义序列组比较，TFRC pcDNA3.1+无义序列组细胞TFRC蛋白的表达、吸光度值、侵袭细胞数升高；与TFRC pcDNA3.1+无义序列组比较，TFRC pcDNA3.1+miR-325模拟物组细胞中TFRC蛋白的表达、吸光度值、侵袭细胞数降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。
结论miR-325在胶质瘤细胞中表达下调并且具有抑癌作用，miR-325低表达患者预后较差。miR-325通过抑制靶基因TFRC的表达抑制癌细胞进展。