探讨长链非编码RNA胃癌相关转录本3(lncRNA GACAT3)在肝癌组织的表达和对肝癌细胞HepG2增殖、侵袭和迁移的影响及其机制。
方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)技术检测新乡医学院第一附属医院收治并手术治疗的73例肝癌患者的癌组织、癌旁组织,PLC/PRF/5、Hep3B、HepG2肝癌细胞,以及正常肝细胞THLE-3中lncRNA GACAT3表达水平;阴性对照小干扰RNA(siRNA)和lncRNA GACAT3 siRNA转染HepG2肝癌细胞,Real-time PCR检测转染48 h后细胞lncRNA GACAT3表达,噻唑蓝(MTT)检测转染24、48、72 h各组细胞增殖能力,细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移侵袭,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路蛋白表达。应用SPSS 21.0软件进行统计,计量资料以均值±标准差(Mean±SD)表示,两组数据采用配对t检验或独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,多组数据两组间比较采用LSD-t检验。
结果肝癌组织lncRNA GACAT3表达水平(3.10±1.93)显著高于癌旁组织(1.02±0.59,t=8.086,P<0.01);肝癌细胞PLC/PRF/5(1.92±0.21,t=7.074,P<0.01)、Hep3B(2.42±0.25,t=9.327,P<0.01)和HepG2(2.96±0.31,t=10.582,P<0.01)中lncRNA GACAT3表达水平均显著高于正常肝细胞(0.97±0.10)。沉默GACAT3组细胞lncRNA GACAT3表达(0.16±0.02)显著低于沉默对照组(1.03±0.11,t=13.478,P<0.01),48 h和72 h细胞增殖能力显著降低(P<0.01),划痕愈合率、细胞迁移侵袭能力显著降低(P<0.01)。细胞中Wnt/β-catenin信号通路蛋白β-catenin(0.15±0.02)及其下游蛋白骨髓细胞瘤病毒癌基因(c-Myc)(0.22±0.02)和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)(0.21±0.02)表达较沉默对照组(0.81±0.08,t=13.863;0.65±0.07,t=9.731;0.78±0.08,t=10.230;P均<0.01)显著降低,p-β-catenin蛋白表达(0.75±0.08)显著高于沉默对照组(0.27±0.03,t=11.972,P<0.01)。
结论lncRNA GACAT3在肝癌中高表达,沉默lncRNA GACAT3能够抑制肝癌细胞增殖迁移侵袭,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。