【摘 要】
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目的:研究大肠杆菌谷氨酸脱羧酶A的基因克隆与表达及其酶学性质.方法:首先采用PCR技术克隆编码大肠杆菌谷氨酸脱羧酶A的基因gadA,并将该基因克隆至载体pET-28a(+)中,形成重组
【机 构】
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浙江工商大学食品与生物工程学院 杭州 310018
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目的:研究大肠杆菌谷氨酸脱羧酶A的基因克隆与表达及其酶学性质.方法:首先采用PCR技术克隆编码大肠杆菌谷氨酸脱羧酶A的基因gadA,并将该基因克隆至载体pET-28a(+)中,形成重组质粒pET28a-gadA;然后将该重组质粒转化至大肠杆菌BL21,构建重组菌株大肠杆菌BL21/pET28a-gadA.进一步采用Ni2+亲和层析色谱分离纯化谷氨酸脱羧酶A,研究其酶学性质.结果:经PCR和双酶切鉴定,重组质粒pET28a-gadA构建成功.SDS-PAGE分析表明Ni2+亲和层析纯化后得到电泳纯级谷氨酸脱羧酶A,其比活力为19U/mg,得率为12.8％.在pH 4.5时,谷氨酸脱羧酶A的酶活力最高.该酶的最适温度为50℃,且在40℃时有较高的热稳定性,70℃时热稳定性较差,酶活力仅为初始酶活的17.9％.Cu2+对该酶的酶活力有较强的抑制作用,Ba2+、Co2+和Mg2+对其酶活力影响不大,Ca2+能显著增加该酶的酶活力.结论:研究结果为深入理解谷氨酸脱羧酶A的酶学性质及其γ-氨基丁酸的制备提供了试验基础.
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