甲硒氨酸耐热邻苯二酚2,3双加氧酶的高表达和分离纯化

来源 :复旦学报：自然科学版 | 被引量 : 0次 | 上传用户：jaeiris

【摘要】

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甲硒氨酸多波长反常散射法是国际上９０年代发展的蛋白质晶体结构测定的新方法，该法得以实施的首要一步是获得硒取代（硫）的高纯蛋白质。通过亚克隆将编码耐热邻苯二酚２，３双加氧酶（简称ＴＣＴＤ）的

【作者】

：

季朝能姜涛

【机构】

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复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室

【出处】

：

复旦学报：自然科学版

【发表日期】

：

2000年3期

【关键词】

：

甲硒氨酸多波长反常散射法表达纯化 TCTD SeMet multiwavelength anomalous diffraction thermostable

【基金项目】

：

国家自然科学基金资助项目 (39770 15 7,39730 15 0 )

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甲硒氨酸多波长反常散射法是国际上９０年代发展的蛋白质晶体结构测定的新方法，该法得以实施的首要一步是获得硒取代（硫）的高纯蛋白质。通过亚克隆将编码耐热邻苯二酚２，３双加氧酶（简称ＴＣＴＤ）的基因ＰＨＥＢ克隆至表达载体ｐＲＳＥＴ，得到了高表达质粒ｐＲＳＥＴ－ＰＨＥＢ，转入Ｍｅｔ缺陷的菌株Ｂ８３４ＤＥ３。通过诱导表达和分离纯化得到了甲硒氨酸参入的ＴＣＴＤ。经质谱测定发现ＴＣＴＤ的所有７个甲硫氨酸都被甲硒

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