【摘 要】
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目的:建立EML4-ALK融合基因质控品,用于评价人类EML4-ALK融合基因突变检测试剂盒的性能。方法:根据人类EML4-ALK融合基因序列,合成EML4-ALK融合基因变体1(V1)和变体3(V3)的基
【机 构】
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中国食品药品检定研究院,中国科学院北京基因组研究所,
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目的:建立EML4-ALK融合基因质控品,用于评价人类EML4-ALK融合基因突变检测试剂盒的性能。方法:根据人类EML4-ALK融合基因序列,合成EML4-ALK融合基因变体1(V1)和变体3(V3)的基因序列。采用限制性内切酶KpnⅠ和HindⅢ对带有目的基因的质粒和表达载体分别进行酶切,将目的基因与载体连接,转化DH5α感受态细胞,筛选阳性菌落进行测序。将测序结果正确的单个菌落进行超声诱导,制备假病毒溶液,并用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法对假病毒溶液提取的RNA进行检测。结果:对人类EML4-ALK融合基因V1和V3质控品进行序列测定和荧光定量RT-PCR检测,结果表明成功建立了人类EML4-ALK融合基因V1和V3假病毒质控品。结论:本研究建立了人类EML4-ALK融合基因变体假病毒质控品的方法。可为药物靶向治疗基因检测试剂质量控制提供参考。
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