论文部分内容阅读
目的建立检测人肥大细胞羧肽酶（hMCCP）的双抗体夹心ELISA法，以hMCCP截短体免疫小鼠，制备鼠源性多克隆抗体。方法PCR法扩增hMCCP-N118基因片段，克隆至pET28原核表达载体，转化大肠杆菌Rosseta（DE3）。用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导重组蛋白的表达，用Ni^2＋-NTA凝胶亲和层析纯化目的蛋白。用纯化重组蛋白免疫小鼠，制备抗hMCCP-N118抗体。间接ELISA测定抗体效价，Western blot鉴定抗体特异性。结果hMCCP截短体在大肠杆菌中高效表达，用纯