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【摘 要】 目的：探索云南花朵的抗肿瘤活性。方法：花朵烘干后磨成粉末，用乙醇提取后浓缩得花朵提取物。将体外培养的肿瘤细胞分成对照组和试验组，每组设6个复孔。用MTS法测试花朵提取物对乳腺癌MDA-MB-231细胞的抑制作用。将有对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖有较好抑制作用的花朵提取物进一步进行肿瘤活性测试。将该花朵提取物分为不同浓度，测试其对乳腺癌MDA-MB-231细胞和肺癌A549细胞的抑制活性。结果：在采集来的10种花朵中，葱莲对乳腺癌MDA-MB-231细胞具有较好的抑制活性，抑制率（43.07±4.52%）与阳性对照药物（47.62±3.24%）接近。进一步研究发现，葱莲对乳腺癌MDA-MB-231细胞和肺癌A549细胞均有抑制活性，并且呈剂量效应关系。结论：葱莲花朵提取物具有较好的抗肿瘤应用前景。
【关键词】 乳腺癌；肺癌；花提取物；体外抑制；葱莲
【中图分类号】R285.5 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2018）09-0024-03
Abstract： ObjectiveTo investigate the effects of ten flowers in Yunnan province on cancer cells. Methods Flowers were dried， pulverized and extracted with ethanol. The cancer cell proliferation inhibition of the extracts of flowers was tested by MTS assays. Human cancer cells were cultured in vitro and divided into control and test groups. Every group was set 6 wells. The positive control group was treated with 5mg/L of arsenic trioxide. The negative control group was treated 1‰ of DMSO. Test groups were treated with 20 mg/L of the extracts of flowers. The extract which showed excellent inhibition of breast cancer MDA-MB-23 cells proliferation was further tested several concentrations on breast cancer MDA-MB-23 cells and lung cancer A549 cells. Results Extract of Zephyranthes candida（Lindl.）Herb showed excellent inhibition of breast cancer MDA-MB-23 cells proliferation the concentration of 20 mg/L. The inhibition rate （43.07±4.52%）was appreciated to that of the positive control group（47.62±3.24%）. The further investigation shows that the extract inhibited cell proliferation of breast cancer MDA-MB-23 cells and lung cancer A549 cells in a dose-dependent manner. Conclusion The extract of Zephyranthes candida（Lindl.）Herb showed an excellent profile in anti-tumor.
Keywords：Breast cancer； Lung cancer； Extract of flowers； Inhition in vitro；Zephyranthes candida（Lindl.）Herb.
在《本草纲目》中，花类药物至少在80种以上，约占植物类药物的1/10以上[1]。花类质地轻灵[2]，花类药物药性较为平和，副作用小，是各名家的常用药物[3-11]，在妇科疾病中应用甚广。恶性肿瘤是严重威胁人类健康和生命的疾病，抗肿瘤药物长春花碱由夹竹桃科植物长春花中提取而来。云南鲜花四季盛开，花朵品质高、产量大[12]。笔者对云南常见的花朵进行抗肿瘤活性筛选，为进一步开发利用“云花”、“云药”提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 细胞、试剂和仪器 乳腺癌MDA-MB-231细胞和肺癌A549细胞购自中国科学院昆明动物研究所。所有花朵采集自云南中医学院呈贡校区和昆明医科大学呈贡校区。乙醇（天津市大茂化学试剂厂），三氧化二砷（云南文山金驰砒霜有限公司）。RPMI1640培养液（美国Hyclone公司）；胎牛血清（兰州百灵生物技术有限公司）；MTS一步法细胞活力检测试剂盒（美国Promega公司）。電热恒温鼓风干燥箱（上海跃进医疗器械有限公司）；SK3300LH 型超声清洗机（上海科导超声仪器有限公司）；CO2培养箱（美国Thermo公司）；全自动酶标仪（美国Bio-Rad公司）。
1.2 实验方法
1.2.1 样品制备 采集茼蒿菊、桂花、凤仙、蜀葵、牵牛、葱莲、百日菊、叶子花、大丽花、杜鹃等云南常见的花朵。50℃烘干，干燥花朵粉碎后浸泡在10倍量的90%乙醇溶液中过夜，过滤后，将滤渣超声提取，重复提取两次，滤液合并后浓缩，得到样品。 1.2.2 活性测试 取对数生长期的细胞接种于96孔板，每孔1×103个细胞。置CO2培养箱中37℃孵育24 h后加入样品。试验组用DMSO溶解，96孔板中DMSO的浓度为千分之一；阴性对照组加入含百分之一DMSO的培养液10 μL，DMSO终浓度为千分之一；阳性对照组加入5 μL五十分之一DMSO的培养液与5 μL三氧化二砷溶液，三氧化二砷溶液终浓度为0.5 mg/L；每组设6复孔，每个实验分别重复3次。放入37℃ CO2培养箱中。48 h后加入20 μL MTS溶液，37℃ CO2培养箱中继续孵育2 h，用全自动酶标仪在490nm测定吸光度（A）。在测试十种花对乳腺癌MDA-MB-231细胞的抑制作用的过程中，试验组花朵提取物的浓度均为20 mg/L。进一步测试葱莲花对乳腺癌MDA-MB-231细胞和肺癌A549细胞的抑制作用时，试验组葱莲提取物的浓度为20 mg/L、4 mg/L、0.8 mg/L。
2 结果
2.1 10种花对乳腺癌MDA-MB-231细胞的抑制作用 采集了云南常见的10种花朵，分别为茼蒿菊、桂花、凤仙、蜀葵、牵牛、葱莲、百日菊、叶子花、大丽花、杜鹃等。将这10种花朵的提取物作为试验组，测试其对乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制活性（图1）。其中，葱莲的抑制率（43.07±4.52%）与阳性对照的抑制率（47.62±3.24%）相近。
2.2 葱莲对乳腺癌MDA-MB-231细胞和肺癌A549细胞的抑制作用 为了进一步探索葱莲的抗肿瘤活性，考察了葱莲提取物对乳腺癌MDA-MB-231细胞和肺癌A549细胞的增殖抑制作用（图2）。试验结果显示，葱莲提取物的浓度为20 mg/L、4 mg/L、0.8 mg/L对乳腺癌MDA-MB-231细胞的抑制率分别为（43.06±1.59）%、（30.20±3.93）%、（2.29±2.12）%；对肺癌A549细胞的抑制率分别为（56.96±0.48）%、（13.85±1.52）%、（0.36±2.71）%；增殖抑制作用呈现量效关系。
3 讨论
药物是治疗恶性肿瘤的重要方法之一，抗肿瘤药物的研究与开发已进入一个崭新的时代[13]。目前应用的很多抗肿瘤药物的副作用较大，而花类药物药性较为平和[2]，从花中可能筛选到副作用较小的抗肿瘤药物。笔者采集了云南常见的10种花朵，将其提取物进行抗肿瘤活性筛选。大部分花朵对乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖无抑制作用，而令人欣喜的是其中葱莲花的提取物对乳腺癌MDA-MB-231细胞和肺癌A549细胞的增殖抑制活性较好，与阳性对照三氧化二砷抑制率相当，并且呈剂量效应关系。
葱莲（Zephyranthes candida （Lindl.）Herb.），又名玉帘、葱兰等，多年生草本植物，在云南各处有种植。有平肝熄风、散热解毒的功能；用于小儿急惊风、癫痫；外用于痈疮红肿[14]。杨简赛等从葱莲鳞茎中分离得到6个化合物[15]，Zengwei Luo等[16]从葱莲整株植物中提取分离到具有抗肿瘤活性的生物碱，尚无对葱莲的花朵进行化学成分及药理活性的相关报道。笔者对葱莲花朵进行抗肿瘤活性测试，提取物浓度为4 mg/L即显示出显著的抗肿瘤活性，并有剂量效应关系。为葱莲在抗肿瘤药物的开发提供了依据。
参考文献
[1]郑国玉， 温长路. 《本草纲目》对花类药物的研究和应用 [J]. 亚太传统医药， 2006，20（9）： 86-89.
[2]刘阿萍， 程虎印， 邵好珍， 等. 花类中药的药性浅析 [J]. 现代中医药， 2015，35（4）： 64-65.
[3]刘文娥， 林洁， 陈艳霞， 等. 尤昭玲教授花类药物的应用经验总结 [J]. 中华中医药杂志， 2014，29（6）： 1866-1868.
[4]张智华， 邢颖， 刘松林， 等. 梅国强应用花类中药治疗妇科疾病的经验 [J]. 湖北中医药大学学报， 2016，18（1）： 107-109.
[5]蔡静， 杨志波， 周蓉， 等. 杨志波教授运用花类药物治疗皮肤病经验 [J]. 湖南中医药大学学报， 2017，37（10）： 1097-1099.
[6]范道长， 刘坤. 徐贵成运用花类药治疗脾胃病经验 [J]. 中医杂志， 2008，49（5）： 405.
[7]胡慧娟. 马大正运用花类药物治疗妇科疾病的经验 [J]. 江苏中医药， 2015，47（8）： 25-27.
[8]纪云西. 胡珂辨证应用花类中药经验 [J]. 江西中医药， 2005，36（6）： 5-7.
[9]魏凌雪， 李軍军， 林晓辉， 等. 柯干名老中医应用花类中药治疗脾胃疾患应用经验 [J]. 中国中医药现代远程教育， 2016，14（2）： 56-57.
[10]胥丽霞， 黄欲晓. 蔡连香教授应用花类中药治疗妇科疾病经验拾萃 [J]. 环球中医药， 2018，11（1）： 93-94.
[11]周胜利， 蔡永亮. 蔡永亮教授运用花类药治疗抑郁性疾病的经验总结 [J]. 中国中医药现代远程教育， 2016，14（22）： 73-74.
[12]严红梅. 云菜、云药、云花、云茶4个绿色农业产业化发展初析 [J]. 云南农业科技， 2006，（S1）： 69-73.
[13]杨大俊. 聚焦抗肿瘤药物研究进展 [J]. 药学进展， 2016，40（1）： 1-2.
[14]华中科技大学.葱莲中具有抗肿瘤作用的化合物及其分离制备方法和应用：中国，CN201110435049.6 [P]. 2012-07-04.
[15]杨简赛， 冯煦， 陈雨， 等. 葱莲鳞茎化学成分研究 [J]. 中药材， 2010，33（11）： 1730-1732.
[16]LUO Z， WANG F， ZHANG J， et al. Cytotoxic Alkaloids from the Whole Plants of Zephyranthes candida [J]. Journal of Natural Products， 2012，75（12）： 2113-2120.
（收稿日期：2018-03-29 编辑：陶希睿）
【关键词】 乳腺癌；肺癌；花提取物；体外抑制；葱莲
【中图分类号】R285.5 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2018）09-0024-03
Abstract： ObjectiveTo investigate the effects of ten flowers in Yunnan province on cancer cells. Methods Flowers were dried， pulverized and extracted with ethanol. The cancer cell proliferation inhibition of the extracts of flowers was tested by MTS assays. Human cancer cells were cultured in vitro and divided into control and test groups. Every group was set 6 wells. The positive control group was treated with 5mg/L of arsenic trioxide. The negative control group was treated 1‰ of DMSO. Test groups were treated with 20 mg/L of the extracts of flowers. The extract which showed excellent inhibition of breast cancer MDA-MB-23 cells proliferation was further tested several concentrations on breast cancer MDA-MB-23 cells and lung cancer A549 cells. Results Extract of Zephyranthes candida（Lindl.）Herb showed excellent inhibition of breast cancer MDA-MB-23 cells proliferation the concentration of 20 mg/L. The inhibition rate （43.07±4.52%）was appreciated to that of the positive control group（47.62±3.24%）. The further investigation shows that the extract inhibited cell proliferation of breast cancer MDA-MB-23 cells and lung cancer A549 cells in a dose-dependent manner. Conclusion The extract of Zephyranthes candida（Lindl.）Herb showed an excellent profile in anti-tumor.
Keywords：Breast cancer； Lung cancer； Extract of flowers； Inhition in vitro；Zephyranthes candida（Lindl.）Herb.
在《本草纲目》中，花类药物至少在80种以上，约占植物类药物的1/10以上[1]。花类质地轻灵[2]，花类药物药性较为平和，副作用小，是各名家的常用药物[3-11]，在妇科疾病中应用甚广。恶性肿瘤是严重威胁人类健康和生命的疾病，抗肿瘤药物长春花碱由夹竹桃科植物长春花中提取而来。云南鲜花四季盛开，花朵品质高、产量大[12]。笔者对云南常见的花朵进行抗肿瘤活性筛选，为进一步开发利用“云花”、“云药”提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 细胞、试剂和仪器 乳腺癌MDA-MB-231细胞和肺癌A549细胞购自中国科学院昆明动物研究所。所有花朵采集自云南中医学院呈贡校区和昆明医科大学呈贡校区。乙醇（天津市大茂化学试剂厂），三氧化二砷（云南文山金驰砒霜有限公司）。RPMI1640培养液（美国Hyclone公司）；胎牛血清（兰州百灵生物技术有限公司）；MTS一步法细胞活力检测试剂盒（美国Promega公司）。電热恒温鼓风干燥箱（上海跃进医疗器械有限公司）；SK3300LH 型超声清洗机（上海科导超声仪器有限公司）；CO2培养箱（美国Thermo公司）；全自动酶标仪（美国Bio-Rad公司）。
1.2 实验方法
1.2.1 样品制备 采集茼蒿菊、桂花、凤仙、蜀葵、牵牛、葱莲、百日菊、叶子花、大丽花、杜鹃等云南常见的花朵。50℃烘干，干燥花朵粉碎后浸泡在10倍量的90%乙醇溶液中过夜，过滤后，将滤渣超声提取，重复提取两次，滤液合并后浓缩，得到样品。 1.2.2 活性测试 取对数生长期的细胞接种于96孔板，每孔1×103个细胞。置CO2培养箱中37℃孵育24 h后加入样品。试验组用DMSO溶解，96孔板中DMSO的浓度为千分之一；阴性对照组加入含百分之一DMSO的培养液10 μL，DMSO终浓度为千分之一；阳性对照组加入5 μL五十分之一DMSO的培养液与5 μL三氧化二砷溶液，三氧化二砷溶液终浓度为0.5 mg/L；每组设6复孔，每个实验分别重复3次。放入37℃ CO2培养箱中。48 h后加入20 μL MTS溶液，37℃ CO2培养箱中继续孵育2 h，用全自动酶标仪在490nm测定吸光度（A）。在测试十种花对乳腺癌MDA-MB-231细胞的抑制作用的过程中，试验组花朵提取物的浓度均为20 mg/L。进一步测试葱莲花对乳腺癌MDA-MB-231细胞和肺癌A549细胞的抑制作用时，试验组葱莲提取物的浓度为20 mg/L、4 mg/L、0.8 mg/L。
2 结果
2.1 10种花对乳腺癌MDA-MB-231细胞的抑制作用 采集了云南常见的10种花朵，分别为茼蒿菊、桂花、凤仙、蜀葵、牵牛、葱莲、百日菊、叶子花、大丽花、杜鹃等。将这10种花朵的提取物作为试验组，测试其对乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制活性（图1）。其中，葱莲的抑制率（43.07±4.52%）与阳性对照的抑制率（47.62±3.24%）相近。
2.2 葱莲对乳腺癌MDA-MB-231细胞和肺癌A549细胞的抑制作用 为了进一步探索葱莲的抗肿瘤活性，考察了葱莲提取物对乳腺癌MDA-MB-231细胞和肺癌A549细胞的增殖抑制作用（图2）。试验结果显示，葱莲提取物的浓度为20 mg/L、4 mg/L、0.8 mg/L对乳腺癌MDA-MB-231细胞的抑制率分别为（43.06±1.59）%、（30.20±3.93）%、（2.29±2.12）%；对肺癌A549细胞的抑制率分别为（56.96±0.48）%、（13.85±1.52）%、（0.36±2.71）%；增殖抑制作用呈现量效关系。
3 讨论
药物是治疗恶性肿瘤的重要方法之一，抗肿瘤药物的研究与开发已进入一个崭新的时代[13]。目前应用的很多抗肿瘤药物的副作用较大，而花类药物药性较为平和[2]，从花中可能筛选到副作用较小的抗肿瘤药物。笔者采集了云南常见的10种花朵，将其提取物进行抗肿瘤活性筛选。大部分花朵对乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖无抑制作用，而令人欣喜的是其中葱莲花的提取物对乳腺癌MDA-MB-231细胞和肺癌A549细胞的增殖抑制活性较好，与阳性对照三氧化二砷抑制率相当，并且呈剂量效应关系。
葱莲（Zephyranthes candida （Lindl.）Herb.），又名玉帘、葱兰等，多年生草本植物，在云南各处有种植。有平肝熄风、散热解毒的功能；用于小儿急惊风、癫痫；外用于痈疮红肿[14]。杨简赛等从葱莲鳞茎中分离得到6个化合物[15]，Zengwei Luo等[16]从葱莲整株植物中提取分离到具有抗肿瘤活性的生物碱，尚无对葱莲的花朵进行化学成分及药理活性的相关报道。笔者对葱莲花朵进行抗肿瘤活性测试，提取物浓度为4 mg/L即显示出显著的抗肿瘤活性，并有剂量效应关系。为葱莲在抗肿瘤药物的开发提供了依据。
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[15]杨简赛， 冯煦， 陈雨， 等. 葱莲鳞茎化学成分研究 [J]. 中药材， 2010，33（11）： 1730-1732.
[16]LUO Z， WANG F， ZHANG J， et al. Cytotoxic Alkaloids from the Whole Plants of Zephyranthes candida [J]. Journal of Natural Products， 2012，75（12）： 2113-2120.
（收稿日期：2018-03-29 编辑：陶希睿）