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根据Slightom等RiA4TL-DNA序列分析结果,设计了一对引物,以Ri质粒DNA为模板,利用PCR方法对rolC基因进行了扩增.利用pGEM-T载体对rolC基因进行了克隆和测序.结果,克隆的DNA片段序列与报道的ORF12阅读框内的rolC序列一致.将pGEM-T-rolC用限制性内切酶SacⅠ酶切,与经SmaⅠ酶切CIAP去磷酸化的pUC19质粒重组,经蓝白斑筛选得到正向重组的pUC19-rolC.再用Xbal-SacⅠ双酶切pUC19-rolC与pBI121,将rolC基因定向克隆到具有Ca