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摘要：目的： 通过一系列的试验证明盐酸小檗碱胶囊含量测定中使用滤纸进行过滤对检测结果的影响。 方法： 通过过滤不同体积的样品液进行试验，证明滤过的体积越大，越能减少因滤纸吸附所带来的影响。 结论： 检测结果表明，滤纸对盐酸小檗碱的吸附严重影响含量测定结果的真实性，使含量测定结果偏低。
关键词： 盐酸小檗碱胶囊；含量测定；滤纸吸附
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】B 【文章编号】1002-3763（2014）04-0050-02
小檗碱又名黄连素，是黄连、黄柏等级植物中含有的一种生物碱，也可以合成得到，主要用于肠道感染的治疗。主要用于治疗胃肠炎、细菌性痢疾等肠道感染、眼结膜炎、化脓性中耳炎等有效。还发现本品有阻断 α-受体，抗心律失常作用。小檗碱的盐酸盐（俗称盐酸黄连素）已广泛用于治疗胃肠炎、细菌性痢疾等，对肺结核、猩红热、急性扁桃腺炎和呼吸道感染也有一定疗效。
盐酸小檗碱胶囊在《中国药典》1995年版[1]、2000年版[2]、2005年版[3]和2010年版[4]均有收载，1995年版和2000年版的是采用重铬酸钾滴定液进行测定，自2005年版起修订为高效液相色谱法，2010年版所载的方法大体与2005年版所载的方法一致，只作了部份修改，把“用滤膜（0.45μm）过滤，弃去初滤液约8ml，精密量取续滤液2ml置25ml量瓶中[2]”修订为“弃去初滤液约8ml，精密量取续滤液2ml置25ml量瓶中[3]”。在没有明确规定过滤操作所采用的材质的情况下，我们一般会使用滤纸进行过滤，这也是我这篇文章想要说明的主要问题，同时“弃去初滤液约8ml”，这一点可能很多人会把它忽视掉，一般会理解为8ml以上或更多，但我司就曾出现这种情况，被抽检该品种，抽检的检验所坚持按照药典所描述的“弃去初滤液约8ml”进行检验，但结果确是偏低甚至是不合格，为了证明是滤纸吸附造成的不合格，我司做了大量的实验去论证。
方案设计如下：严格按照药典所描述的“弃去初滤液约8ml”，那为了证明滤纸是有吸附的，或者说如何消除滤纸对主成份的吸附，我们将采用续滤不同量的方法进行论证，在初滤量相同的情况下，只有续滤更多的溶液才会减少滤纸对主成份吸附的影响。
1 仪器与试药
1.1 仪器
岛津LC2010-C高效液相色谱仪，色谱柱：迪马C18；梅特勒AB135-S电子天平，定性滤纸：杭州新华纸业有限公司
1.2试药
盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110713-201212，分子式：C20H18ClNO4，分子量：371，纯度86.7%）；水为纯化水；盐酸小檗碱胶囊（规格0.1g，批号120901，均为我公司所生产）
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：磷酸盐缓冲液[0.05mol/l磷酸二氢钾溶液和0.05mol/l庚烷磺酸钠溶液（1：1），含0.2%三乙胺，并用磷酸调节pH值至3.0]-乙腈（60：40）；检测长：263nm；流速：1.0ml/min；理论板数：按盐酸小檗碱峰计算不低于3000，盐酸小檗碱峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。
2.2 含量测定方法[4]
取装量差异项下内容物，混合均匀，精密称取适量（约相当于盐酸小檗碱40mg0，置100ml量瓶中，加沸水适量，使盐酸小檗碱溶解，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液8ml，精密量取续滤液2ml，置25ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精密20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，另取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，用沸水溶解，放冷，用水定量稀释制成每1ml约含32μg的溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。
3.3 本实验方案的设计
由三位检验员对该批品进行测定。在弃去初滤液8ml是固定的情况下，如何才能减少或消除滤纸对主成份的吸附致使含量偏低的影响，我们将以过滤不同体积的供试品来进行比较，同时分取10ml离心后取上清液进行稀释，同法测定。结果见表1。
3 讨论
结果显示，过滤不同体积的供试品，含量数据程一定的梯度增长；而离心处理的结果明显比滤纸过滤高2.6%-5.3%，可见使用滤纸过滤对主成份有较大的吸附作用，而且过滤的量越大，越能减少滤纸的吸附影响。
盐酸小檗碱胶囊含量测定法中，《中国药典》2010年版修订时与2005年版最大的区别就是去掉了“用滤膜（0.45μm）过滤”这一操作，在孔爱英[5]的研究中发现，使用滤膜进行过滤，虽然对产品的含量影响不大，但有检测过该产品的人员不易发现，实际操作中，使用滤膜弃去8ml的初滤液是很难做到的。
使用滤纸进行过滤操作，虽然过滤的体积越多，越能减少吸附的影响，但要全部过滤完也是很难做到的，同时在实验中我们发现，即使是相同品牌相同批号的滤纸，过滤的速度也不尽相同，经常能过滤80ml已经是极限，而且很费时，当然也有能完全滤完的。
在供试品溶液的制备过程中，使用沸水溶解，沸水的温度和振摇的方式对含量的测定也存在一定的局限性，对含量的真实结果也有一定的影响，建议未来方法的修订可更多的考滤供试品溶液制备的方法。
参考文献：
[1]国家药典委员会. 《中国药典》2000年版. 二部[S]. 1995：569.
[2]国家药典委员会. 《中国药典》2000年版. 二部[S]. 2000：550.
[3]国家药典委员会. 《中国药典》2005年版. 二部[S]. 2005：466.
[4]国家药典委员会. 《中国药典》2010年版. 二部[S]. 2010：640.
[5]孔爱英，陶胜源. 有关HPLC法测定盐酸小檗碱征含量的问题探讨[J]. 中国药品标准2011年第12卷第2期： 83-86
关键词： 盐酸小檗碱胶囊；含量测定；滤纸吸附
【中图分类号】R927.2 【文献标识码】B 【文章编号】1002-3763（2014）04-0050-02
小檗碱又名黄连素，是黄连、黄柏等级植物中含有的一种生物碱，也可以合成得到，主要用于肠道感染的治疗。主要用于治疗胃肠炎、细菌性痢疾等肠道感染、眼结膜炎、化脓性中耳炎等有效。还发现本品有阻断 α-受体，抗心律失常作用。小檗碱的盐酸盐（俗称盐酸黄连素）已广泛用于治疗胃肠炎、细菌性痢疾等，对肺结核、猩红热、急性扁桃腺炎和呼吸道感染也有一定疗效。
盐酸小檗碱胶囊在《中国药典》1995年版[1]、2000年版[2]、2005年版[3]和2010年版[4]均有收载，1995年版和2000年版的是采用重铬酸钾滴定液进行测定，自2005年版起修订为高效液相色谱法，2010年版所载的方法大体与2005年版所载的方法一致，只作了部份修改，把“用滤膜（0.45μm）过滤，弃去初滤液约8ml，精密量取续滤液2ml置25ml量瓶中[2]”修订为“弃去初滤液约8ml，精密量取续滤液2ml置25ml量瓶中[3]”。在没有明确规定过滤操作所采用的材质的情况下，我们一般会使用滤纸进行过滤，这也是我这篇文章想要说明的主要问题，同时“弃去初滤液约8ml”，这一点可能很多人会把它忽视掉，一般会理解为8ml以上或更多，但我司就曾出现这种情况，被抽检该品种，抽检的检验所坚持按照药典所描述的“弃去初滤液约8ml”进行检验，但结果确是偏低甚至是不合格，为了证明是滤纸吸附造成的不合格，我司做了大量的实验去论证。
方案设计如下：严格按照药典所描述的“弃去初滤液约8ml”，那为了证明滤纸是有吸附的，或者说如何消除滤纸对主成份的吸附，我们将采用续滤不同量的方法进行论证，在初滤量相同的情况下，只有续滤更多的溶液才会减少滤纸对主成份吸附的影响。
1 仪器与试药
1.1 仪器
岛津LC2010-C高效液相色谱仪，色谱柱：迪马C18；梅特勒AB135-S电子天平，定性滤纸：杭州新华纸业有限公司
1.2试药
盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110713-201212，分子式：C20H18ClNO4，分子量：371，纯度86.7%）；水为纯化水；盐酸小檗碱胶囊（规格0.1g，批号120901，均为我公司所生产）
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：磷酸盐缓冲液[0.05mol/l磷酸二氢钾溶液和0.05mol/l庚烷磺酸钠溶液（1：1），含0.2%三乙胺，并用磷酸调节pH值至3.0]-乙腈（60：40）；检测长：263nm；流速：1.0ml/min；理论板数：按盐酸小檗碱峰计算不低于3000，盐酸小檗碱峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。
2.2 含量测定方法[4]
取装量差异项下内容物，混合均匀，精密称取适量（约相当于盐酸小檗碱40mg0，置100ml量瓶中，加沸水适量，使盐酸小檗碱溶解，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液8ml，精密量取续滤液2ml，置25ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精密20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，另取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，用沸水溶解，放冷，用水定量稀释制成每1ml约含32μg的溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。
3.3 本实验方案的设计
由三位检验员对该批品进行测定。在弃去初滤液8ml是固定的情况下，如何才能减少或消除滤纸对主成份的吸附致使含量偏低的影响，我们将以过滤不同体积的供试品来进行比较，同时分取10ml离心后取上清液进行稀释，同法测定。结果见表1。
3 讨论
结果显示，过滤不同体积的供试品，含量数据程一定的梯度增长；而离心处理的结果明显比滤纸过滤高2.6%-5.3%，可见使用滤纸过滤对主成份有较大的吸附作用，而且过滤的量越大，越能减少滤纸的吸附影响。
盐酸小檗碱胶囊含量测定法中，《中国药典》2010年版修订时与2005年版最大的区别就是去掉了“用滤膜（0.45μm）过滤”这一操作，在孔爱英[5]的研究中发现，使用滤膜进行过滤，虽然对产品的含量影响不大，但有检测过该产品的人员不易发现，实际操作中，使用滤膜弃去8ml的初滤液是很难做到的。
使用滤纸进行过滤操作，虽然过滤的体积越多，越能减少吸附的影响，但要全部过滤完也是很难做到的，同时在实验中我们发现，即使是相同品牌相同批号的滤纸，过滤的速度也不尽相同，经常能过滤80ml已经是极限，而且很费时，当然也有能完全滤完的。
在供试品溶液的制备过程中，使用沸水溶解，沸水的温度和振摇的方式对含量的测定也存在一定的局限性，对含量的真实结果也有一定的影响，建议未来方法的修订可更多的考滤供试品溶液制备的方法。
参考文献：
[1]国家药典委员会. 《中国药典》2000年版. 二部[S]. 1995：569.
[2]国家药典委员会. 《中国药典》2000年版. 二部[S]. 2000：550.
[3]国家药典委员会. 《中国药典》2005年版. 二部[S]. 2005：466.
[4]国家药典委员会. 《中国药典》2010年版. 二部[S]. 2010：640.
[5]孔爱英，陶胜源. 有关HPLC法测定盐酸小檗碱征含量的问题探讨[J]. 中国药品标准2011年第12卷第2期： 83-86