【摘 要】
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目的 在原核表达系统中表达脂多糖应激新分子编码的蛋白质.方法 PCR扩增Hlrg Cdna编码区,克隆入表达载体pcTAT中,构建成融合6His的表达载体pcTAT-lrg,转化E.coli BL21(DE3),
【机 构】
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第四军医大学劳动与环境卫生学教研室,陕西省疾控中心,第四军医大学西京医院,第四军医大学生物化学与分子生物学教研室
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目的 在原核表达系统中表达脂多糖应激新分子编码的蛋白质.方法 PCR扩增Hlrg Cdna编码区,克隆入表达载体pcTAT中,构建成融合6His的表达载体pcTAT-lrg,转化E.coli BL21(DE3),以IPTG诱导.表达产物用SDS-PAGE及凝胶光密度扫描分析,用Ni-NTA亲和层析柱纯化.结果 经过IPTG诱导4 h,表达出相对分子质量(Mr)约25 000的蛋白,占菌体总蛋白的51%.表达产物为可溶性的,用Ni-NTA亲和层析柱纯化的表达蛋白达到电泳纯.加入培养液中的纯化蛋白,可在30 min内进入HEK293细胞.结论 在E.coli中成功地高表达人Lrg融合蛋白,并对其进行初步纯化,为人Lrg功能的研究打下基础.
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