树鼩肝细胞的分离和培养

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目的观察体外培养的树鼩肝细胞形态结构和生物合成功能。方法采用体外两步灌流法分离树鼩肝细胞,用L15培养基予以培养,光、电镜下动态观察培养肝细胞形态结构,同时并检测不同时相点培养上清中清蛋白、总蛋白及甲胎蛋白的含量。结果该方法分离的肝细胞经台盼蓝拒染试验证实肝细胞即时存活率达90%以上,1h~3h肝细胞开始壁并伸展,同时可见双核细胞,培养3d 10d肝细胞相互接触,布满视野,肝细胞维持此状态至培养18d,接种1d肝细胞合成清蛋白为6.8g·L~1·d~1,7d达峰值为12.8g·L~1·d~1,并维持至14d,以后逐渐减少至终止培养;培养1d肝细胞的甲胎蛋白分泌量处于较高水平为3.45mg·L~1·d~1·3d达峰值为6.23mg·L~1·d~1,以后逐渐减少,17d检测不出。结论体外培养的树鼩肝细胞具有良好的形态结构和生物合成功能,能够满足肝炎病毒体外培养的需要,也为我们深入研究肝炎病毒复制机制创造了实验条件。
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