环状RNA_0054537联合连翘苷调控肝癌细胞生物学特性的分子机制

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目的

探讨连翘苷对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及其对环状RNA_0054537(circ_0054537)/微小RNA(miRNA,miR)-409-3p的调控作用。

方法

体外培养肝癌细胞Hep3B,使用不同剂量(5、10、20 μmol/L)的连翘苷处理Hep3B细胞;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭能力;采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测circ_0054537、miR-409-3p的表达量;双荧光素酶报告实验检测circ_0054537、miR-409-3p的靶向关系;Hep3B细胞中分别转染si-circ_0054537、pcDNA-circ_0054537,采用上述方法检测细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭。组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析。

结果

连翘苷可明显降低细胞活力[(1.276±0.110)个比(1.031±0.090)、(0.637±0.050)、(0.507±0.040)个,F=244.841,P<0.05],增高凋亡率[(7.34±0.62)%比(12.44±1.03)%、(22.86±2.12)%、(28.16±2.71)%,F=244.841,P<0.05],减少迁移细胞数[(154.15±12.76)个比(124.06±10.04)、(78.05±7.25)、(61.13±5.83)个]及侵袭细胞数[(112.04±10.08)个比(89.43±8.13)、(57.11±5.12)、(43.08±4.05)个,F=186.018、166.514,P<0.05],抑制circ_0054537的表达[(1.00±0.10)比(0.40±0.04),t=16.713,P<0.05],促进miR-409-3p的表达[(1.02±0.11)比(3.42±0.31),t=21.889,P<0.05];转染si-circ_0054537可明显抑制细胞活力[(1.264±0.10)比(0.686±0.06)]、迁移[(151.96±11.17)比(79.03±7.21)]及侵袭能力[(115.28±11.05)比(68.14±6.43),t=14.869、16.457、11.062,P<0.05],增高凋亡率[(7.26±0.71)%比(23.79±2.06)%,t=22.759,P<0.05];双荧光素酶报告实验证实circ_0054537可靶向结合miR-409-3p;转染pcDNA-circ_0054537可明显逆转连翘苷对Hep3B细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的调控作用。

结论

连翘苷可通过下调circ_0054537的表达而上调miR-409-3p的表达从而抑制肝癌细胞增殖、迁移、侵袭及促进细胞凋亡。

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