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摘要：对江苏省泰州地区宠物犬样品进行沙门氏菌、弯曲菌、分枝杆菌和布鲁氏菌的分离鉴定，结果显示，肛拭样品、犬糧中沙门氏菌检出率分别为1.91%、2.23%，空肠弯曲菌、结肠弯曲菌的阳性率分别为4.69%、1.23%，分枝杆菌ESAT-6、CFP-10的基因检出率分别为25.18%、18.09%；其余基因检出率较低，RBT检出粗糙型布鲁氏菌感染犬的阳性率为2.01%。
关键词：宠物；人兽共患细菌病；流行现状；防控
中图分类号： S855.99 文献标志码： A
文章编号：1002-1302（2015）03-0198-02
随着人们生活水平不断提高，人与动物的关系越来越密切，许多人将各种小动物，尤其是犬作为宠物饲养。但是由于缺乏正确的饲养管理和预防疫病的知识，宠物人兽共患病的发病率也日渐增高。引起人致病的宠物重要人兽共患细菌病包括沙门氏菌、弯曲菌、结核分枝杆菌、布鲁氏菌等。沙门氏菌感染犬、猫、家禽、爬行动物较常见，人类接触粪便中含有大量沙门菌的动物会增加患病的概率。弯曲菌是全球范围内主要的人兽共患性肠道病菌之一[1]，它是包括犬、猫在内的许多野生、家养动物的正常寄生菌，动物感染后通常无明显病症，但可长期向外排菌，从而污染食物和饮水，引起人类感染[1]。犬的结核病主要由人型和牛型分枝杆菌造成，多为亚临床表现，易与其他呼吸道疾病混淆。已知的布鲁氏菌宿主包括家畜、家禽、野生动物在内的60多种动物，能够通过犬、鹿等宠物传染给人[2]；大多数犬呈隐性感染，主要表现为生殖器官发炎，可引起流产和各种组织的局部病灶；人主要因为食入被污染的肉或处理布鲁氏菌感染而引起流产和分娩的犬而感染。本研究对江苏省泰州地区的宠物犬样品进行病原菌的分离鉴定，旨在了解宠物犬中重要人兽共患细菌病的流行状况，为有效防控疾病提供参考资料，具有公共卫生学意义。
1 材料与方法
1.1 样品来源
2011年10月至2013年10月，从江苏泰州7家宠物医院就诊病犬和2个宠物犬养殖场的健康犬中采集肛拭样品682份，从15家宠物店采集179份犬粮样品进行沙门氏菌检测；对从宠物医院收集就诊的405份粪便样品进行弯曲菌检测；采集282份犬、猫鼻液、尿液及饲料样品进行结核分枝杆菌检测；采集348份血清样品进行布鲁氏菌血清学检测。
1.2 样品的分离培养和鉴定
按照GB 4789.4—2010《食品微生物学检验 沙门氏菌检验》[3]及何晓青主编的《卫生防疫细菌检验》[4]中的相关章节进行沙门氏菌的培养、分离和鉴定。应用多重PCR方法[5]结合常规分离方法对采集的宠物样品进行弯曲菌的流行状况分析。采用组织消化液提取法提取鼻拭子和尿液样本基因组DNA，扩增16S rRNA、IS6110、Rv3878、IS1081、ESAT-6、CFP-10基因[6]。参考国标《动物布鲁氏菌病诊断技术》进行虎红平板凝集试验（rose-bengal plate agglutination test，RBT），包括粗糙型RBT和光滑型RBT；以及试管凝集试验（standard tube agglutination test，SAT），包括粗糙型SAT和光滑型SAT。
1.3 培养基与试剂
增菌、分离、鉴定用的培养基由北京陆桥技术有限责任公司提供；弯曲菌培养基CCDA琼脂购自OXOID公司；Taq酶、buffer、dNTPs、marker购自北京天根生物工程公司；布鲁氏菌平板凝集抗原、试管凝集抗原及犬布鲁氏病标准阳性血清由中国疾病预防控制中心传染病预防控制所生产；常规试剂为国产分析纯。
2 结果与分析
2.1 宠物犬携带沙门氏菌的情况
对861份样品进行检测，共分离到沙门氏菌17株，其中7家宠物医院和2个宠物犬养殖场被检犬肛拭子样品共计682份，检出沙门氏菌阳性样品13份，阳性率为1.91%；15家宠物店被检犬粮样品共计179份，检出沙门氏菌阳性样品4份，阳性率为2.23%。
2.2 宠物群体中弯曲菌的流行病学分析
由表1可知，在宠物医院收集的405份粪便样品中，19份检出空肠弯曲菌阳性，阳性率为4.69%，5份检出结肠弯曲菌阳性，阳性率为1.23%。将收集的宠物犬样品按年龄分类，在229份幼年犬样品中，17份为空肠弯曲菌阳性，阳性率为7.42%，4份为结肠弯曲菌阳性，阳性率为1.75%；176份成年犬样品中，2份为空肠弯曲菌阳性，阳性率为1.14%，1份为结肠弯曲菌阳性，阳性率为0.57%。进一步比较可知，幼年犬空肠弯曲菌的检测率极显著高于成年犬（P<001）。将收集的宠物犬样品按城区、郊区的饲养地区分类，城区312份样品样品中，6份为空肠弯曲菌阳性，阳性率为1.92%，1份为结肠弯曲菌阳性，阳性率为0.32%；郊区93份样品中，13份为空肠弯曲菌阳性，阳性率为13.98%，4份为结肠弯曲菌阳性，阳性率为4.30%。进一步比较可知，郊区样本中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的检出率极显著高于城区（P<0.01）。
2.4 布鲁氏菌血清学检测结果
对采集的348份血清样品进行布鲁氏病抗体检测，分别用粗糙型、光滑型抗原RBT初检，对阳性血清进行SAT。结果RBT检出粗糙型布鲁氏菌感染犬的血样7份，占检测总样品数的2.01%，SAT检出粗糙型布鲁氏菌感染犬的血样4份，占检测总样品数的1.15%。本试验调查的犬样年龄阶段分布较广，不同年龄犬对布鲁氏菌的感染率见表3；性别比率为公犬58%、母犬42%，不同性别犬的调查结果见表4。
3 结论
随着人们生活水平的不断提高，饲养宠物的人越来越多，而相关的饲养规范和疾病预防措施的缺失以及不到位导致宠物发病率日渐增高，加速了动物病原向人类传播的速度。犬感染沙门氏菌的途径很多，可能通过进食被污染的水、饲料或其他食物感染，也可经过伤口感染，甚至是可能由人感染后将细菌传染给犬，引起犬和人共同发病，从而形成循环感染。本研究采集的肛拭样品中，沙门氏菌检出率为1.91%，健康犬可能曾被沙门氏菌隐性感染而未发病，或曾感染发病后成为带菌者不断向外排菌，对于长期与犬密切接触的主人是很大的威胁。犬粮的沙门氏菌阳性检出率为223%，沙门氏菌在原料选择、生产加工、运输储藏以及销售过程中都有可能污染犬粮，因此加强对饲料中沙门氏菌污染的控制不仅可以减少犬发病，也是减少人感染沙门氏菌的一项重要措施。
关键词：宠物；人兽共患细菌病；流行现状；防控
中图分类号： S855.99 文献标志码： A
文章编号：1002-1302（2015）03-0198-02
随着人们生活水平不断提高，人与动物的关系越来越密切，许多人将各种小动物，尤其是犬作为宠物饲养。但是由于缺乏正确的饲养管理和预防疫病的知识，宠物人兽共患病的发病率也日渐增高。引起人致病的宠物重要人兽共患细菌病包括沙门氏菌、弯曲菌、结核分枝杆菌、布鲁氏菌等。沙门氏菌感染犬、猫、家禽、爬行动物较常见，人类接触粪便中含有大量沙门菌的动物会增加患病的概率。弯曲菌是全球范围内主要的人兽共患性肠道病菌之一[1]，它是包括犬、猫在内的许多野生、家养动物的正常寄生菌，动物感染后通常无明显病症，但可长期向外排菌，从而污染食物和饮水，引起人类感染[1]。犬的结核病主要由人型和牛型分枝杆菌造成，多为亚临床表现，易与其他呼吸道疾病混淆。已知的布鲁氏菌宿主包括家畜、家禽、野生动物在内的60多种动物，能够通过犬、鹿等宠物传染给人[2]；大多数犬呈隐性感染，主要表现为生殖器官发炎，可引起流产和各种组织的局部病灶；人主要因为食入被污染的肉或处理布鲁氏菌感染而引起流产和分娩的犬而感染。本研究对江苏省泰州地区的宠物犬样品进行病原菌的分离鉴定，旨在了解宠物犬中重要人兽共患细菌病的流行状况，为有效防控疾病提供参考资料，具有公共卫生学意义。
1 材料与方法
1.1 样品来源
2011年10月至2013年10月，从江苏泰州7家宠物医院就诊病犬和2个宠物犬养殖场的健康犬中采集肛拭样品682份，从15家宠物店采集179份犬粮样品进行沙门氏菌检测；对从宠物医院收集就诊的405份粪便样品进行弯曲菌检测；采集282份犬、猫鼻液、尿液及饲料样品进行结核分枝杆菌检测；采集348份血清样品进行布鲁氏菌血清学检测。
1.2 样品的分离培养和鉴定
按照GB 4789.4—2010《食品微生物学检验 沙门氏菌检验》[3]及何晓青主编的《卫生防疫细菌检验》[4]中的相关章节进行沙门氏菌的培养、分离和鉴定。应用多重PCR方法[5]结合常规分离方法对采集的宠物样品进行弯曲菌的流行状况分析。采用组织消化液提取法提取鼻拭子和尿液样本基因组DNA，扩增16S rRNA、IS6110、Rv3878、IS1081、ESAT-6、CFP-10基因[6]。参考国标《动物布鲁氏菌病诊断技术》进行虎红平板凝集试验（rose-bengal plate agglutination test，RBT），包括粗糙型RBT和光滑型RBT；以及试管凝集试验（standard tube agglutination test，SAT），包括粗糙型SAT和光滑型SAT。
1.3 培养基与试剂
增菌、分离、鉴定用的培养基由北京陆桥技术有限责任公司提供；弯曲菌培养基CCDA琼脂购自OXOID公司；Taq酶、buffer、dNTPs、marker购自北京天根生物工程公司；布鲁氏菌平板凝集抗原、试管凝集抗原及犬布鲁氏病标准阳性血清由中国疾病预防控制中心传染病预防控制所生产；常规试剂为国产分析纯。
2 结果与分析
2.1 宠物犬携带沙门氏菌的情况
对861份样品进行检测，共分离到沙门氏菌17株，其中7家宠物医院和2个宠物犬养殖场被检犬肛拭子样品共计682份，检出沙门氏菌阳性样品13份，阳性率为1.91%；15家宠物店被检犬粮样品共计179份，检出沙门氏菌阳性样品4份，阳性率为2.23%。
2.2 宠物群体中弯曲菌的流行病学分析
由表1可知，在宠物医院收集的405份粪便样品中，19份检出空肠弯曲菌阳性，阳性率为4.69%，5份检出结肠弯曲菌阳性，阳性率为1.23%。将收集的宠物犬样品按年龄分类，在229份幼年犬样品中，17份为空肠弯曲菌阳性，阳性率为7.42%，4份为结肠弯曲菌阳性，阳性率为1.75%；176份成年犬样品中，2份为空肠弯曲菌阳性，阳性率为1.14%，1份为结肠弯曲菌阳性，阳性率为0.57%。进一步比较可知，幼年犬空肠弯曲菌的检测率极显著高于成年犬（P<001）。将收集的宠物犬样品按城区、郊区的饲养地区分类，城区312份样品样品中，6份为空肠弯曲菌阳性，阳性率为1.92%，1份为结肠弯曲菌阳性，阳性率为0.32%；郊区93份样品中，13份为空肠弯曲菌阳性，阳性率为13.98%，4份为结肠弯曲菌阳性，阳性率为4.30%。进一步比较可知，郊区样本中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的检出率极显著高于城区（P<0.01）。
2.4 布鲁氏菌血清学检测结果
对采集的348份血清样品进行布鲁氏病抗体检测，分别用粗糙型、光滑型抗原RBT初检，对阳性血清进行SAT。结果RBT检出粗糙型布鲁氏菌感染犬的血样7份，占检测总样品数的2.01%，SAT检出粗糙型布鲁氏菌感染犬的血样4份，占检测总样品数的1.15%。本试验调查的犬样年龄阶段分布较广，不同年龄犬对布鲁氏菌的感染率见表3；性别比率为公犬58%、母犬42%，不同性别犬的调查结果见表4。
3 结论
随着人们生活水平的不断提高，饲养宠物的人越来越多，而相关的饲养规范和疾病预防措施的缺失以及不到位导致宠物发病率日渐增高，加速了动物病原向人类传播的速度。犬感染沙门氏菌的途径很多，可能通过进食被污染的水、饲料或其他食物感染，也可经过伤口感染，甚至是可能由人感染后将细菌传染给犬，引起犬和人共同发病，从而形成循环感染。本研究采集的肛拭样品中，沙门氏菌检出率为1.91%，健康犬可能曾被沙门氏菌隐性感染而未发病，或曾感染发病后成为带菌者不断向外排菌，对于长期与犬密切接触的主人是很大的威胁。犬粮的沙门氏菌阳性检出率为223%，沙门氏菌在原料选择、生产加工、运输储藏以及销售过程中都有可能污染犬粮，因此加强对饲料中沙门氏菌污染的控制不仅可以减少犬发病，也是减少人感染沙门氏菌的一项重要措施。