【摘 要】
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华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)是一种重要的人兽共患病原,T细胞免疫调节蛋白(TIP)存在于该虫体生长发育的各个阶段,能够抑制T细胞免疫应答,有助于虫体在宿主体内寄生.为了
【机 构】
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黑龙江八一农垦大学动物科技学院,黑龙江 大庆 163319
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华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)是一种重要的人兽共患病原,T细胞免疫调节蛋白(TIP)存在于该虫体生长发育的各个阶段,能够抑制T细胞免疫应答,有助于虫体在宿主体内寄生.为了解华支睾吸虫TIP蛋白的生物信息学及原核表达该蛋白,本研究利用DNAStar软件对GenBank中华支睾吸虫TIP基因编码蛋白的生物信息学进行分析,结果显示华支睾吸虫TIP蛋白表面具有较丰富的B细胞抗原表位且集中在其C段(CsTIP-C),具有多个α-螺旋和β-折叠.采用RT-PCR扩增CsTIP-C片段,构建pET-22b-CsTIP-C重组质粒,经双酶切及测序鉴定后,转化BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导后SDS-PAGE检测该蛋白的表达情况,获得的重组蛋白经切胶纯化后进行western blot鉴定.PCR扩增及测序结果显示,扩增得到的CsTIP-C为930 bp,编码309个氨基酸.SDS-PAGE结果显示,CsTIP-C在33 ku处有目的蛋白条带,western blot结果表明该重组蛋白具有良好的反应原性.本研究首次完成了CsTIP-C的克隆表达,并证明该蛋白具有反应原性,为华支睾吸虫病免疫诊断试剂盒的研发奠定了基础.
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