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摘要：目的： 探讨宫颈癌组织中乳铁蛋白（LF）基因与蛋白的表达及其临床意义。方法： 选取73例宫颈癌患者为研究对象，将其纳入研究组（A组，n=73）；将同期入院体检的100例健康志愿者归入对照组（B组，n=100）。两组患者均通过免疫组化法与实时荧光定量PCR技术行LF检测，对比其LF蛋白与基因检测结果差异，分析肿瘤分期、肿瘤分化程度及宫颈淋巴结转移情况对LF蛋白与基因检测结果的影响。结果： B组LF蛋白及基因检测结果显著高于A组（P<0.5）；A组患者中，肿瘤Ⅰ期者LF蛋白及基因检测结果显著高于肿瘤Ⅱ期者（P<0.5）；宫颈淋巴结转移者LF蛋白及基因检测结果显著高于未转移者（P<0.5）；不同肿瘤分化程度患者LF蛋白及基因检测结果对比无统计学意义（P>0.05）。结论： 临床可将LF基因与蛋白检测作为评估宫颈癌的重要标志以提升早期诊断准确性，值得临床推广。
关键词：宫颈癌；乳铁蛋白；临床诊断
临床研究表明，宫颈癌作为一种常见妇科恶性肿瘤，恶性程度较高，具有较强隐匿性，是威胁女性生命健康安全的头号疾病，早期诊断及治疗是促进患者病情转归，改善其预后质量的关键。随着相关研究的深入，部分学者指出，乳铁蛋白作为一种单体糖蛋白，在宫颈癌早期诊断中具有重要价值[1]。本次研究以此为方向，分别选取73例宫颈癌患者及100例健康志愿者为受试对象，分析其LF基因与蛋白表达差异，现报告如下。
1 资料与方法
1.1.1 一般资料 选取2010年2月-2014年5月通过病理检查确诊的73例宫颈癌患者为研究对象， 将其纳入研究组（A组，n=73）；将同期入院体检的100例健康志愿者归入对照组（B组，n=100）。A组患者均通过病理活检，符合《2014年NCCN宫颈癌临床实践指南》[2]中相关诊断标准；年龄26-59岁，平均（43.1±4.1）岁；婚配情况：已婚62例，未婚11例；生育情况：已育65例，未育8例；肿瘤分期情况：Ⅰ期18例，Ⅱ期55例；病理类型：腺癌7例，鳞状细胞癌67例；肿瘤分化程度：高分化6例，中分化52例，低分化15例；宫颈淋巴结转移情况：转移62例，未转移11例。B组受试者年龄25-60岁，平均（43.5±4.0）岁；婚配情况：已婚82例，未婚18例；生育情况：已育85例，未育15例。两组受试者在年龄、婚配及生育情况等一般资料对比上差异不显著（P>0.05），具有可比性。
1.1.2纳入标准 ①符合相关诊断标准者；②临床资料完整者；③签署知情同意书者；④预计存活时间超过2个月者。
1.1.3 排除标准 ①合并其他妇科疾病、肝肾功能障碍、心脑血管疾病或其他恶性肿瘤者；②中途退出或随访期失联者；③未成年或年龄超过70岁者；④精神障碍、意识不清或听力、语言障碍者。
1.2 方法 两组患者均通过免疫组化法（SABC法）与实时荧光定量PCR技术行LF检测：
1.2.1 SABC法[3]：①常规组织切片，制作石蜡片；②置石蜡片于烤箱中57℃烘烤0.5h，取出冷却20min，依次浸入二甲苯Ⅰ溶液、二甲苯Ⅱ溶液及二甲苯Ⅲ溶液中各5min；依次浸入无水乙醇Ⅰ溶液、无水乙醇Ⅱ溶液及无水乙醇Ⅲ溶液中各5min，完成脱蜡；③常规抗原修复，消除内源性过氧化物活性，小牛血清封闭；④将样本置入稀释后的LF一抗中12h（浓度为1：100，温度为4℃）；⑤PBS冲洗30min，加入ABC试剂，静置2h；⑥ PBS重复冲洗30min，DAB显色；⑦苏木素复染后脱水封片；⑧置于显微镜下观察并记录检测结果。
1.2.2 实时荧光定量PCR检测[3]：①设计并合成LF引物序列；②分光光度计检测待检组织中RNA纯度；③合成cDNA，应用PCR技术新实时定量检测。
1.3观察指标 观察对比两组患者LF蛋白与基因检测结果差异，分析肿瘤分期、肿瘤分化程度及宫颈淋巴结转移情况对LF蛋白与基因检测结果的影响。
1.4 统计学方法 应用统计学软件SPSS18.0分析数据，计量资料以均数±标准差表示，组间比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 LF蛋白检测结果对比分析
B组LF蛋白检测结果显著高于A组，对比差异具有统计学意义（P<0.5）；A组患者中，肿瘤Ⅰ期者LF蛋白检测结果显著高于肿瘤Ⅱ期者（P<0.5）；宫颈淋巴结转移者LF蛋白检测结果显著高于未转移者（P<0.5）；不同肿瘤分化程度患者LF蛋白检测结果对比无统计学意义（P>0.05）；详细见下表1。
注，*与B组对比P<0.05；#与肿瘤Ⅰ期对比P<0.50；@与高分化对比P<0.05；&与宫颈淋巴结转移对比P<0.05（同表2）。
2.2 LF基因检测结果对比分析
B组LF基因检测结果显著高于A组，对比差异具有统计学意义（P<0.5）；A组患者中，肿瘤Ⅰ期者LF基因检测结果显著高于肿瘤Ⅱ期者（P<0.5）；宫颈淋巴结转移者LF基因检测结果显著高于未转移者（P<0.5）；不同肿瘤分化程度患者LF基因检测结果对比无统计学意义（P>0.05）；详细见下表2。
3 讨论
本次研究为探讨LF基因与蛋白的表达对宫颈癌诊断的临床应用价值，分别选取73例宫颈癌患者及100例健康志愿者为受试对象，发现健康志愿者所在B组的LF检测结果均高于宫颈癌A组2-5倍，同李一丁等[4]研究者报告内容基本一致。宫颈癌作为威胁女性健康安全的常见恶性肿瘤，早期诊断具有一定隐匿性，为临床确诊及后续治疗工作的开展造成较大难度。LF作为一种具有杀菌活性的单体糖蛋白，广谱抗菌效果突出，不仅能有效抑制多种病毒，还能调节患者免疫功能，提升机体抵抗力。本次研究发现，A组患者中，肿瘤Ⅰ期及未出现宫颈淋巴结转移的受试者LF基因及蛋白表达结果均较肿瘤Ⅱ期及存在宫颈淋巴结转移患者高，提示临床不仅可将LF基因与蛋白表达作为诊断宫颈癌的重要指标，还可将其用于肿瘤分期与评估淋巴结转移情况中，对后续针对性治疗工作的开展有利。仇志琴等[5]研究者也在报告中得到类似结论，其表明，LF参与铁的转运过程，抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡、抗氧化及抗病毒作用突出[6]，一旦临床检测其出现异常减少情况，即提示可能存在癌变风险，需引起高度重视，以尽早诊断尽早治疗，以此提升患者预后水平，促进病情转归。
综上所述，临床可将LF基因与蛋白检测作为评估宫颈癌的重要标志以提升早期诊断准确性，利于后续置治疗工作的顺利开展，值得临床推广。
参考文献：
[1]胡春芳，张秀琴，王静，等.宫颈腺癌发生相关蛋白的蛋白质组学初步研究[J].现代生物医学进展，2013，13（28）：5467-5472.
[2]周晖，彭永排，俞进，等.《2014年NCCN宫颈癌临床实践指南》解读（续）[J].实用妇产科杂志，2014，30（7）：505-507.
[3] 刘洋，许新华.常见妇科恶性肿瘤的化学治疗研究进展[J].山东医药，2014，33（18）：101-103.
[4] 李一丁，赵先英，贺建，等.乳铁蛋白抗肿瘤作用及机制研究进展[J].实用癌症杂志，2012，27（6）：678-679.
[5] 仇志琴，陶永辉，黄玉政，等.人乳铁蛋白对卵巢上皮性癌细胞增殖及细胞免疫调节的作用[J].中华妇产科杂志，2012，47（6）：467-469.
[6] 陈晓泓，张博恒.乳铁蛋白在肿瘤治疗中的作用机制[J].复旦学报（医学版），2010，37（1）：119-121.
关键词：宫颈癌；乳铁蛋白；临床诊断
临床研究表明，宫颈癌作为一种常见妇科恶性肿瘤，恶性程度较高，具有较强隐匿性，是威胁女性生命健康安全的头号疾病，早期诊断及治疗是促进患者病情转归，改善其预后质量的关键。随着相关研究的深入，部分学者指出，乳铁蛋白作为一种单体糖蛋白，在宫颈癌早期诊断中具有重要价值[1]。本次研究以此为方向，分别选取73例宫颈癌患者及100例健康志愿者为受试对象，分析其LF基因与蛋白表达差异，现报告如下。
1 资料与方法
1.1.1 一般资料 选取2010年2月-2014年5月通过病理检查确诊的73例宫颈癌患者为研究对象， 将其纳入研究组（A组，n=73）；将同期入院体检的100例健康志愿者归入对照组（B组，n=100）。A组患者均通过病理活检，符合《2014年NCCN宫颈癌临床实践指南》[2]中相关诊断标准；年龄26-59岁，平均（43.1±4.1）岁；婚配情况：已婚62例，未婚11例；生育情况：已育65例，未育8例；肿瘤分期情况：Ⅰ期18例，Ⅱ期55例；病理类型：腺癌7例，鳞状细胞癌67例；肿瘤分化程度：高分化6例，中分化52例，低分化15例；宫颈淋巴结转移情况：转移62例，未转移11例。B组受试者年龄25-60岁，平均（43.5±4.0）岁；婚配情况：已婚82例，未婚18例；生育情况：已育85例，未育15例。两组受试者在年龄、婚配及生育情况等一般资料对比上差异不显著（P>0.05），具有可比性。
1.1.2纳入标准 ①符合相关诊断标准者；②临床资料完整者；③签署知情同意书者；④预计存活时间超过2个月者。
1.1.3 排除标准 ①合并其他妇科疾病、肝肾功能障碍、心脑血管疾病或其他恶性肿瘤者；②中途退出或随访期失联者；③未成年或年龄超过70岁者；④精神障碍、意识不清或听力、语言障碍者。
1.2 方法 两组患者均通过免疫组化法（SABC法）与实时荧光定量PCR技术行LF检测：
1.2.1 SABC法[3]：①常规组织切片，制作石蜡片；②置石蜡片于烤箱中57℃烘烤0.5h，取出冷却20min，依次浸入二甲苯Ⅰ溶液、二甲苯Ⅱ溶液及二甲苯Ⅲ溶液中各5min；依次浸入无水乙醇Ⅰ溶液、无水乙醇Ⅱ溶液及无水乙醇Ⅲ溶液中各5min，完成脱蜡；③常规抗原修复，消除内源性过氧化物活性，小牛血清封闭；④将样本置入稀释后的LF一抗中12h（浓度为1：100，温度为4℃）；⑤PBS冲洗30min，加入ABC试剂，静置2h；⑥ PBS重复冲洗30min，DAB显色；⑦苏木素复染后脱水封片；⑧置于显微镜下观察并记录检测结果。
1.2.2 实时荧光定量PCR检测[3]：①设计并合成LF引物序列；②分光光度计检测待检组织中RNA纯度；③合成cDNA，应用PCR技术新实时定量检测。
1.3观察指标 观察对比两组患者LF蛋白与基因检测结果差异，分析肿瘤分期、肿瘤分化程度及宫颈淋巴结转移情况对LF蛋白与基因检测结果的影响。
1.4 统计学方法 应用统计学软件SPSS18.0分析数据，计量资料以均数±标准差表示，组间比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 LF蛋白检测结果对比分析
B组LF蛋白检测结果显著高于A组，对比差异具有统计学意义（P<0.5）；A组患者中，肿瘤Ⅰ期者LF蛋白检测结果显著高于肿瘤Ⅱ期者（P<0.5）；宫颈淋巴结转移者LF蛋白检测结果显著高于未转移者（P<0.5）；不同肿瘤分化程度患者LF蛋白检测结果对比无统计学意义（P>0.05）；详细见下表1。
注，*与B组对比P<0.05；#与肿瘤Ⅰ期对比P<0.50；@与高分化对比P<0.05；&与宫颈淋巴结转移对比P<0.05（同表2）。
2.2 LF基因检测结果对比分析
B组LF基因检测结果显著高于A组，对比差异具有统计学意义（P<0.5）；A组患者中，肿瘤Ⅰ期者LF基因检测结果显著高于肿瘤Ⅱ期者（P<0.5）；宫颈淋巴结转移者LF基因检测结果显著高于未转移者（P<0.5）；不同肿瘤分化程度患者LF基因检测结果对比无统计学意义（P>0.05）；详细见下表2。
3 讨论
本次研究为探讨LF基因与蛋白的表达对宫颈癌诊断的临床应用价值，分别选取73例宫颈癌患者及100例健康志愿者为受试对象，发现健康志愿者所在B组的LF检测结果均高于宫颈癌A组2-5倍，同李一丁等[4]研究者报告内容基本一致。宫颈癌作为威胁女性健康安全的常见恶性肿瘤，早期诊断具有一定隐匿性，为临床确诊及后续治疗工作的开展造成较大难度。LF作为一种具有杀菌活性的单体糖蛋白，广谱抗菌效果突出，不仅能有效抑制多种病毒，还能调节患者免疫功能，提升机体抵抗力。本次研究发现，A组患者中，肿瘤Ⅰ期及未出现宫颈淋巴结转移的受试者LF基因及蛋白表达结果均较肿瘤Ⅱ期及存在宫颈淋巴结转移患者高，提示临床不仅可将LF基因与蛋白表达作为诊断宫颈癌的重要指标，还可将其用于肿瘤分期与评估淋巴结转移情况中，对后续针对性治疗工作的开展有利。仇志琴等[5]研究者也在报告中得到类似结论，其表明，LF参与铁的转运过程，抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡、抗氧化及抗病毒作用突出[6]，一旦临床检测其出现异常减少情况，即提示可能存在癌变风险，需引起高度重视，以尽早诊断尽早治疗，以此提升患者预后水平，促进病情转归。
综上所述，临床可将LF基因与蛋白检测作为评估宫颈癌的重要标志以提升早期诊断准确性，利于后续置治疗工作的顺利开展，值得临床推广。
参考文献：
[1]胡春芳，张秀琴，王静，等.宫颈腺癌发生相关蛋白的蛋白质组学初步研究[J].现代生物医学进展，2013，13（28）：5467-5472.
[2]周晖，彭永排，俞进，等.《2014年NCCN宫颈癌临床实践指南》解读（续）[J].实用妇产科杂志，2014，30（7）：505-507.
[3] 刘洋，许新华.常见妇科恶性肿瘤的化学治疗研究进展[J].山东医药，2014，33（18）：101-103.
[4] 李一丁，赵先英，贺建，等.乳铁蛋白抗肿瘤作用及机制研究进展[J].实用癌症杂志，2012，27（6）：678-679.
[5] 仇志琴，陶永辉，黄玉政，等.人乳铁蛋白对卵巢上皮性癌细胞增殖及细胞免疫调节的作用[J].中华妇产科杂志，2012，47（6）：467-469.
[6] 陈晓泓，张博恒.乳铁蛋白在肿瘤治疗中的作用机制[J].复旦学报（医学版），2010，37（1）：119-121.