【摘 要】
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目的 原核表达肠道病毒71型3C蛋白酶（enterovirus 71 3C protease, EV71-3Cpro）并制备其特异性多克隆抗体。方法 首先依据密码子优化原则合成EV71-3Cpro基因，将其克隆到pET-28a表达载体NdeⅠ和XhoⅠ位点间构建重组质粒，再以冷CaCl2法将其转化到大肠杆菌E.coli Rosetta（DE3）感受态细胞中，优化原核表达条件。以HisTrapTM亲
【基金项目】
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国家自然科学基金项目,项目编号：81703546； 安徽省自然科学基金项目,项目编号：1808085QH265； 安徽省高等学校自然科学研究项目,项目编号：KJ2021A0839,YJS20210549； 安徽省省级研究生创新项目,项目编号：2022XSCX129；
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目的 原核表达肠道病毒71型3C蛋白酶（enterovirus 71 3C protease, EV71-3Cpro）并制备其特异性多克隆抗体。方法 首先依据密码子优化原则合成EV71-3Cpro基因，将其克隆到pET-28a表达载体NdeⅠ和XhoⅠ位点间构建重组质粒，再以冷CaCl2法将其转化到大肠杆菌E.coli Rosetta（DE3）感受态细胞中，优化原核表达条件。以HisTrapTM亲和层析柱进行分离纯化，以纯化的EV71-3Cpro作为抗原免疫大鼠，分离血清后以酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）、蛋白质印迹法（western blotting, WB）鉴定多克隆抗体的效价及其特异性。结果 ELISA和WB结果显示制备的大鼠抗EV71-3Cpro多克隆抗体效价达1∶1 024 000,且具有较好的特异性。结论 抗EV71-3Cpro多克隆抗体的成功制备为EV71-3Cpro生物学功能的研究及其联合疫苗的开发奠定了实验基础。
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