【摘 要】
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目的:探讨长非编码RNA(lncRNA)UCA1作为miR216b的“分子海绵”结合miR-216b后的命运变化.方法:提取人HEK293T细胞基因组,以特异性引物PCR扩增UCA1基因并克隆至pcDNA6.0b载体,
【机 构】
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军事医学科学院基础医学研究所,北京,100850
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目的:探讨长非编码RNA(lncRNA)UCA1作为miR216b的“分子海绵”结合miR-216b后的命运变化.方法:提取人HEK293T细胞基因组,以特异性引物PCR扩增UCA1基因并克隆至pcDNA6.0b载体,用氨苄西林抗性筛选阳性克隆,重组质粒pcDNA6-UCA1转染HEK293T和HeLa细胞并鉴定其表达水平.向HEK293T和HeLa细胞转染miR-216b类似物,同时用放线菌素D抑制细胞转录,收取3个时间点的细胞总RNA并鉴定其完整性,反转录获得cDNA后,采用实时荧光定量PCR技术检测各时间点UCA1的水平,测定其半衰期.pcDNA6-UCA1转染细胞24 h后,转染miR-216b类似物或miR-216b抑制剂,并使用放线菌素D抑制转录,收取3个时间点的细胞总RNA,qRT-PCR检测UCA1半衰期.结果:构建的pcDNA6-UCA1过表达质粒转入HEK293T细胞后,qRT-PCR检测UCA1表达水平显著提高;miR-216b能够降低细胞内源或外源过表达的UCA1稳定性,加速UCA1的降解,显著缩短其半衰期;使用miR-216b的抑制剂,UCA1的半衰期延长.结论:miR-216b能够加速lncRNA-UCA1的降解,为研究miRNA与lncRNA的相互作用提供了新的思路.
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