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摘 要：目的 百合麦冬饮配伍的对血清药物在血管内皮细胞代谢水平的作用研究。方法 采用脂多糖（LPS）作用内皮细胞，分析百合麦冬饮药物血清对内皮素的代谢水平的影响。结果 百合麦冬饮血清可降低LPS导致的NO与ET-1的升高。结论 百合麦冬饮配伍可以平衡血管内皮的渗透作用调节，对于预防和控制不良环境因素和职业因素引起的慢性阻塞性肺病的气虚痰阻症具有积极的作用。
关键词：百合麦冬饮 药物血清 血管内皮细胞 一氧化氮 内皮素
中图分类号：R285 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2019）05（a）-0209-02
传统中医认为气虚伤阴可造成瘀血的产生，伤阴导致血脉枯涸，气虚导致血行无力，因而引起瘀血。不良环境因素和职业因素引起的慢性阻塞性肺病符合中医的气虚血瘀痰阻证的特点，百合和麦冬是很好的养阴清益气药物，中医临床上多以养阴生津和益气药物来治疗气虚瘀血症[1]。该实验观察百合麦冬饮的药物血清，对脂多糖（ LPS）造模损伤的血管内皮细胞（VEC）代谢参数（NO、 ET-1）的影响调节作用，探讨治疗气虚瘀血所致的慢性阻塞性肺病的干预机制。
1 材料与方法
1.1 试剂与仪器
RPMI-1640培养基（GIBCO，USA）;胰蛋白酶（MERCK，USA）;一氧化氮（NO）检测试剂（南京聚力生物）;内皮素（ET）检测试剂（ELISA北京福瑞生物）; 酶标仪（BIO-RAD公司580型，USA）[1]。
1.2 药物及血清的制备
百合、麦冬购自西安市医药公司，新西兰种家兔，基础直肠体温38.8℃～39.5℃，体重2.2～2.6kg;西安交通大学医学实验动物中心，实验动物合格证号：医动字第08-018。
实验分组为全药组（百合15g+麦冬15g）、百合组（百合 15g）、麥冬组（麦冬15g），同时设正常对照组和造模组。
水煎剂制备方法： 以参考文献方法，称取各组药物量，加入蒸馏水回流提取2次滤液，浓缩使煎剂最终浓度含生药0.14g/mL。
药物血清制备：以参考文献的方法[2]，新西兰家兔16只，其中全药组、百合组、麦冬组和正常对照组各4只。各药物组用水煎剂（4.2g/kg）每天灌胃;正常对照组用生理盐水，各组共灌胃3d后家兔采血，离心后，分离血清，过滤除菌冻存。各组的药物血清1.5mL加入8.5mLDMEM培养液，得到15%药物血清培养液。空白组血清以同样方法制备。
造模：用25μg/mL的脂多糖对血管内皮细胞（VEC）刺激造模。
1.3 血管内皮细胞（VEC）代谢参数测定
ET的测定：各组用药物作用12h，取上清液1.5mL加入25μL10%的EDTANa2和40μL（400U）的抑肽酶，混匀后3000r/min离心10min，取上清，-80℃保存备用。应用放射免疫法测定ET含量。
NO测定：各组药物作用人脐静脉内皮细胞（HUVEC）培养12h后取上清液，按试剂盒说明进行测定。
1.4 数据处理
采用PASS软件分析数据。采用t检验分析显著性差异。
2 结果
2.1 药物血清对NO活性的影响
如表1所示，各用药组培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）12h后，测定结果显示，与对照组相比，LPS可使VEC上清液中NO指标升高（P<0.01）;与造模组相比，百合麦冬各药物血清组对LPS所致NO水平的升高有不同程度的下调（P<0.05）。
2.2 药物血清对ET-1的分泌的影响
如表2所示，各用药组培养人脐静脉内皮细胞12h后，结果显示，LPS可使HUVEC上清液中ET指标升高（P<0.01），百合麦冬各组药物血清干预后，与造模组相比各组细胞对LPS作用后的ET指标均有下调（P<0.05）。其中百合组有非常显著性差异。
3 讨论
3.1 血清药物与中药直接作用的效果分析
该实验引入血清药理学方法，体外研究百合麦冬饮对血管内皮细胞的影响作用。血清药理学方法用于中药干预治疗气虚瘀血性慢性阻塞性肺病有如下优点：采用含有中药汤剂的动物血清培养细胞可以直接观察中药的药物学效应;便于观察和追踪药物的代谢和吸收情况，去除体外实验各种干扰因素的影响;为建立中药复方的药动—药效结合模型提供了客观依据[1]。而中药直接使用的缺点在于：直接加入体外培养细胞系，往往由于中药复方中较多的杂质成分、酸碱度、渗透压等影响实验结果[2]。因此，药物血清法相对可靠性，能较为客观真实地阐明中药的药效计量和作用机制，可以从一定角度揭示中药和复方在胃肠内代谢过程中活性成分的转化和改变。
3.2 中药养阴益气类药物对气虚瘀血性慢性阻塞性肺病干预分析
血瘀症是诸多疾病中的一个重要症候，其病理变化是血脉中血液的正常循环流动状态发生改变[3]，血管内皮细胞可因多种因素作用而受到损伤，如我们造模采用的脂多糖LPS等。通常机体的内分泌细胞，如内皮细胞自分泌或旁分泌作用产生的高效缩血管因子ET-1与舒血管因子 NO之间保持着一定的动态平衡，与其他因子一起在维持血管张力、调节内皮通透性，建立了内环境的气血平衡体系。一旦失衡，各种细胞释放趋化因子、生长因子、粘附因子，导致血瘀症的形成，也是造成气虚瘀血性慢性阻塞性肺病的原因之一。
综上，百合麦冬饮在抑制NO和ET-1升高的同时，维持VEC的正常生理功能和动态平衡，在血瘀症的治疗和缓解气虚瘀血性慢性阻塞性肺病的进程中起到积极的干预作用，可以有效应对与控制血瘀症的形成与发生，对于预防和治疗因环境因素导致的气虚瘀血性慢性阻塞性肺病具有积极的作用。
参考文献
[1] 仲浩，吴德芹，周晶，等.养阴益气活血方药对血管内皮细胞的影响[J].药学与临床研究，2013，21（3）：244-246.
[2] 张旭，李国春，许冬青，等.养阴益气活血方药抗VEC凋亡的研究[A].2006国际传统医药创新与发展态势论坛[C].2006：131-133.
[3] Fung YC，Liu SQ.Elementary mechanics of the endothelium of blood vessels[J].Biomech Eng，1993，115（1）：1-12.
关键词：百合麦冬饮 药物血清 血管内皮细胞 一氧化氮 内皮素
中图分类号：R285 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2019）05（a）-0209-02
传统中医认为气虚伤阴可造成瘀血的产生，伤阴导致血脉枯涸，气虚导致血行无力，因而引起瘀血。不良环境因素和职业因素引起的慢性阻塞性肺病符合中医的气虚血瘀痰阻证的特点，百合和麦冬是很好的养阴清益气药物，中医临床上多以养阴生津和益气药物来治疗气虚瘀血症[1]。该实验观察百合麦冬饮的药物血清，对脂多糖（ LPS）造模损伤的血管内皮细胞（VEC）代谢参数（NO、 ET-1）的影响调节作用，探讨治疗气虚瘀血所致的慢性阻塞性肺病的干预机制。
1 材料与方法
1.1 试剂与仪器
RPMI-1640培养基（GIBCO，USA）;胰蛋白酶（MERCK，USA）;一氧化氮（NO）检测试剂（南京聚力生物）;内皮素（ET）检测试剂（ELISA北京福瑞生物）; 酶标仪（BIO-RAD公司580型，USA）[1]。
1.2 药物及血清的制备
百合、麦冬购自西安市医药公司，新西兰种家兔，基础直肠体温38.8℃～39.5℃，体重2.2～2.6kg;西安交通大学医学实验动物中心，实验动物合格证号：医动字第08-018。
实验分组为全药组（百合15g+麦冬15g）、百合组（百合 15g）、麥冬组（麦冬15g），同时设正常对照组和造模组。
水煎剂制备方法： 以参考文献方法，称取各组药物量，加入蒸馏水回流提取2次滤液，浓缩使煎剂最终浓度含生药0.14g/mL。
药物血清制备：以参考文献的方法[2]，新西兰家兔16只，其中全药组、百合组、麦冬组和正常对照组各4只。各药物组用水煎剂（4.2g/kg）每天灌胃;正常对照组用生理盐水，各组共灌胃3d后家兔采血，离心后，分离血清，过滤除菌冻存。各组的药物血清1.5mL加入8.5mLDMEM培养液，得到15%药物血清培养液。空白组血清以同样方法制备。
造模：用25μg/mL的脂多糖对血管内皮细胞（VEC）刺激造模。
1.3 血管内皮细胞（VEC）代谢参数测定
ET的测定：各组用药物作用12h，取上清液1.5mL加入25μL10%的EDTANa2和40μL（400U）的抑肽酶，混匀后3000r/min离心10min，取上清，-80℃保存备用。应用放射免疫法测定ET含量。
NO测定：各组药物作用人脐静脉内皮细胞（HUVEC）培养12h后取上清液，按试剂盒说明进行测定。
1.4 数据处理
采用PASS软件分析数据。采用t检验分析显著性差异。
2 结果
2.1 药物血清对NO活性的影响
如表1所示，各用药组培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）12h后，测定结果显示，与对照组相比，LPS可使VEC上清液中NO指标升高（P<0.01）;与造模组相比，百合麦冬各药物血清组对LPS所致NO水平的升高有不同程度的下调（P<0.05）。
2.2 药物血清对ET-1的分泌的影响
如表2所示，各用药组培养人脐静脉内皮细胞12h后，结果显示，LPS可使HUVEC上清液中ET指标升高（P<0.01），百合麦冬各组药物血清干预后，与造模组相比各组细胞对LPS作用后的ET指标均有下调（P<0.05）。其中百合组有非常显著性差异。
3 讨论
3.1 血清药物与中药直接作用的效果分析
该实验引入血清药理学方法，体外研究百合麦冬饮对血管内皮细胞的影响作用。血清药理学方法用于中药干预治疗气虚瘀血性慢性阻塞性肺病有如下优点：采用含有中药汤剂的动物血清培养细胞可以直接观察中药的药物学效应;便于观察和追踪药物的代谢和吸收情况，去除体外实验各种干扰因素的影响;为建立中药复方的药动—药效结合模型提供了客观依据[1]。而中药直接使用的缺点在于：直接加入体外培养细胞系，往往由于中药复方中较多的杂质成分、酸碱度、渗透压等影响实验结果[2]。因此，药物血清法相对可靠性，能较为客观真实地阐明中药的药效计量和作用机制，可以从一定角度揭示中药和复方在胃肠内代谢过程中活性成分的转化和改变。
3.2 中药养阴益气类药物对气虚瘀血性慢性阻塞性肺病干预分析
血瘀症是诸多疾病中的一个重要症候，其病理变化是血脉中血液的正常循环流动状态发生改变[3]，血管内皮细胞可因多种因素作用而受到损伤，如我们造模采用的脂多糖LPS等。通常机体的内分泌细胞，如内皮细胞自分泌或旁分泌作用产生的高效缩血管因子ET-1与舒血管因子 NO之间保持着一定的动态平衡，与其他因子一起在维持血管张力、调节内皮通透性，建立了内环境的气血平衡体系。一旦失衡，各种细胞释放趋化因子、生长因子、粘附因子，导致血瘀症的形成，也是造成气虚瘀血性慢性阻塞性肺病的原因之一。
综上，百合麦冬饮在抑制NO和ET-1升高的同时，维持VEC的正常生理功能和动态平衡，在血瘀症的治疗和缓解气虚瘀血性慢性阻塞性肺病的进程中起到积极的干预作用，可以有效应对与控制血瘀症的形成与发生，对于预防和治疗因环境因素导致的气虚瘀血性慢性阻塞性肺病具有积极的作用。
参考文献
[1] 仲浩，吴德芹，周晶，等.养阴益气活血方药对血管内皮细胞的影响[J].药学与临床研究，2013，21（3）：244-246.
[2] 张旭，李国春，许冬青，等.养阴益气活血方药抗VEC凋亡的研究[A].2006国际传统医药创新与发展态势论坛[C].2006：131-133.
[3] Fung YC，Liu SQ.Elementary mechanics of the endothelium of blood vessels[J].Biomech Eng，1993，115（1）：1-12.