【摘 要】
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目的 探讨Rap1 A DNA甲基化在同型半胱氨酸(Hcy)促进小鼠单核巨噬细胞RAW264.7增殖中的作用.方法 将处于对数生长期的RAW264.7细胞分为对照组(Hcy 0 μmol/L)和不同浓度的Hcy
【机 构】
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宁夏血管损伤与修复研究重点实验室;宁夏医科大学基础医学院,宁夏银川市750004;宁夏医科大学公共卫生与管理学院,宁夏银川市750004;宁夏医科大学基础学院实验中心,宁夏银川市,750004;宁夏医
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目的 探讨Rap1 A DNA甲基化在同型半胱氨酸(Hcy)促进小鼠单核巨噬细胞RAW264.7增殖中的作用.方法 将处于对数生长期的RAW264.7细胞分为对照组(Hcy 0 μmol/L)和不同浓度的Hcy(20,40,60,80,100μmol/L)干预组,24 h后用XTT检测细胞活力;Edu检测细胞增殖情况;qRT-PCR和Western blot检测Rap1A的mRNA和蛋白的表达;甲基化特异性PCR法(MSP)检测Rap 1A启动子区甲基化改变;激光共聚焦显微镜观察Rap1A的变化;将Rap1A干扰腺病毒转染RAW264.7细胞并用Hcy刺激,检测Rap1A的mRNA和蛋白水平的变化及细胞的增殖情况.结果 与对照组相比,不同浓度的Hcy干预细胞后,细胞活力增强,其中100 μmol/L Hcy浓度最为明显(P＜0.01),且细胞增殖水平明显增加(P＜0.01);经Hcy刺激后,细胞Rap1A的mRNA和蛋白表达量显著增加(P＜0.01),启动子区甲基化水平降低(P＜0.01);干扰Rap1A的表达后能够部分逆转Hcy所致的细胞增殖(P＜0.01).结论 Rap1A启动子区低甲基化介导了Hcy导致的RAW264.7细胞增殖.
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