利用地塞米松构建建鲤肝切片脂变模型

来源 :江苏农业科学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:djgohx
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
  摘要:用地塞米松构建建鲤肝切片脂变模型,并探索最佳建模浓度,初步探究地塞米松致建鲤肝脏脂变的作用机理。建鲤活体取肝,用振荡切片机制备厚度为300 μm的建鲤肝切片,27 ℃培养箱中预培养2 h。将试验分为试验组和空白对照组,试验组用含浓度为0.039 3、0.393 0、3.930 0、39.300 0、393.000 0 mg/L地塞米松的L-15培养基于 27 ℃ 培养箱中培养12 h,空白对照组用L-15培养基培养相同时间,培养结束后,收集试验组和空白对照组中上清液和肝切片。参照试剂盒说明检测上清液中谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)活性,肝切片匀浆中三磷酸腺(ATP)、总蛋白(TP)含量,甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、游离脂肪酸(FFA)含量以及脂肪酸合成酶(FAS)活性。结果显示,建鲤肝切片经地塞米松诱导后,ATP含量变化不大;当地塞米松浓度为3.93 mg/L时,试验组的其他指标与空白对照组差异极显著(P<0.01)。由此说明,用浓度为3.93 mg/L地塞米松诱导建鲤肝切片12 h可以成功构建建鲤肝切片脂变模型。
  关键词:建鲤;肝切片;地塞米松;脂变;脂肪肝;糖皮质激素
  中图分类号: S941.8 文献标志码: A 文章编号:1002-1302(2017)01-0146-04
  肝脏作为生物体内的重要器官,在能量代谢和物质循环中具有重要作用,同时也是蛋白质、脂肪合成的重要场所[1]。近年来,随着水产养殖的迅速发展,鱼类脂肪肝和肝肿大普遍存在,但目前还没有较好的治疗方法,患病鱼类品质下降,抗病能力降低,严重影响水产养殖健康持续发展。鱼类脂肪肝的成因复杂,普遍认为,养殖条件下投喂营养不均衡的配合饲料(如高糖、高脂)以及养殖期间投喂过量,造成肝脏脂类物质代谢发生障碍,脂肪沉积于肝脏的速度远远超过脂肪转移的速度,导致甘油三酯在肝细胞内异常沉积[2]。然而,有关高等哺乳动物的研究表明,脂肪肝的形成与糖皮质激素慢性升高有密切联系[3]。许多研究证实,糖皮质激素影响肝脏脂肪代谢,诱导脂肪肝和肝肿大[4-6];过多的脂肪沉积是糖皮质激素造成脂肪肝和肝肿大的主要原因[7]。
  集约化养殖条件下,鱼类受多种应激因子刺激。当应激原存在时,下丘脑-脑垂体-肾间组织轴受到刺激,使促肾上腺皮质激素(adreno cortico tropic hormone,简称ACTH)分泌增加,ACTH作用于肾间组织,从而引起糖皮质激素(皮质醇)分泌增加,导致血液中糖皮质激素含量升高[8]。急性应激常常导致皮质醇含量数倍甚至数十倍地增加,而慢性应激(如高密度养殖时的拥挤胁迫等)则使血液中皮质醇含量在数周后仍然保持较高水平,但也有皮质醇在1周后恢复到正常水平[9]。
  本试验用不同浓度的地塞米松模拟鱼体内不同含量的糖皮质激素,恒温培养的建鲤肝切片模拟鱼体内肝脏,构建由地塞米松引起的建鲤肝脏脂变模型。目前,用地塞米松构建肝脏脂变模型并不陌生,国内外学者单独或与高脂饮食并用构建小鼠急性脂肪肝模型,但主要集中在陆生动物上,对水生动物研究较少。殷国俊等将孵化出96 h的斑马鱼暴露在添加50 mg/L地塞米松的水中,经过24 h后,斑马鱼的肝脏显著增大了40%,此阶段的斑马鱼是卵黄囊为内源性营养,表明地塞米松在没有外源性营养的情况下,可以诱导斑马鱼的肝肿大(注:相关试验尚未公开发表)。刘英娟等单独使用四氯化碳成功构建鲤鱼肝细胞脂变模型,用该模型成功筛选出护肝中药枸杞多糖[10];卢荣华等用脂肪乳剂成功构建草鱼肝细胞脂变模型[11];国外学者在青鳉鱼上成功构建肝脏脂變模型,并用该模型成功筛选出护肝药物[12]。该试验通过地塞米松诱导建鲤肝切片12 h后,成功构建建鲤肝脏脂变模型,为筛选相关治疗药物提供理论模型。
  1 材料与方法
  1.1 试验用鱼
  试验用建鲤取自中国水产科学院淡水渔业研究中心渔场,体质健康无病。将建鲤放入循环水系统暂养1周,养水温度为25 ℃,每天定时定量投喂商品饲料。
  1.2 主要试剂和仪器
  地塞米松(dexamethasone)、二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,简称DMSO),购于美国Sigma公司;谷丙转氨酶(glutamate pyruvic transaminase,简称GPT)、谷草转氨酶(glutamic oxaloacetic transaminase,简称GOT)、三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,简称ATP)、总蛋白(total protein,简称TP)、甘油三脂(triglyceride,简称TG)、总胆固醇(total cholesterol,简称TC)、游离脂肪酸(free fatty acids,简称FFA)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthetase,简称FAS)等试剂盒,购自南京建成生物工程研究所;振荡切片机、723分光光度计,购自上海欣茂仪器有限公司;酶标仪MK3,购自美国Thermo公司。
  1.3 建鲤肝切片的制备与培养
  无菌条件下,建鲤消毒麻醉后,超净台内取出肝脏并置于PBS缓冲液中,持续通入含95% O2、5% CO2的混合气体。用PBS缓冲液清洗肝组织3次后,用解剖刀处理成体积为0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm的肝组织块,2%的低熔点胶包埋,30 min后固定肝组织,振荡切片机制备厚度为300 μm的肝切片。将上述肝组织切片置于含1 mL L-15培养基的24孔板中。
  1.4 试验设计
  本试验设试验组和空白对照组,每组4个重复;试验前,各组用L-15培养基27 ℃恒温箱中预培养2 h后,吸弃上清。空白对照组换用新鲜L-15培养基继续培养12 h,试验组用含浓度为0.039 3、0.393 0、3.930 0、39.300 0、393.000 0 mg/L 地塞米松的L-15培养基培养相同时间,试验结束后收集上清液和肝切片。   1.5 建鲤精密肝切片活力检测
  建鲤肝切片经地塞米松诱导12 h后收集并称其质量,加入9倍体积的沸双蒸水,制成10%的组织匀浆,沸水中煮 10 min,3 500 r/min离心10 min,取上清液,按ATP测试盒说明书测定三磷酸腺苷含量。
  1.6 生化指标测定
  地塞米松诱导建鲤肝切片12 h后,收集上清液和肝切片。按试剂盒说明书分别测定TP、FFA、TG、TC的含量,GPT、GOT、FAS活性。
  1.7 数据分析
  试验数据用SPSS 22.0进行整理分析。采用One-Way ANOVA检验法进行显著性分析,结果以“平均值±标准差”表示。其中,在0.01水平上差异显著用“**”表示,在0.05水平上差异显著用“*”表示。
  2 结果与分析
  2.1 地塞米松对建鲤肝切片活性的影响
  由图1可知,建鲤肝切片经地塞米松诱导12 h后,试验组与空白对照组相比,ATP含量虽然有所降低但差异不显著(P>0.05)。由此推断,在该浓度剂量范围内,地塞米松对建鲤肝切片活性的影响较小。
  2.2 地塞米松对建鲤肝切片抗氧化能力的影响
  由图2可知,随着地塞米松浓度的增加,超氧化物歧化酶的活性先降低,然后保持相对稳定。当地塞米松浓度超过0.393 0 mg/L时,试验组与空白对照组差异显著(P<0.01);当浓度超过3.93 mg/L后超氧化物歧化酶活性保持相对稳定。
  2.3 地塞米松對建鲤肝切片中总蛋白含量的影响
  由图3可知,随着地塞米松浓度的增加,总蛋白含量先逐渐降低后保持相对稳定,当浓度达到3.930 0 mg/L时,总蛋白含量达到最低点;超过该浓度,总蛋白含量保持相对稳定。
  2.4 地塞米松对建鲤肝切片中GPT、GOT活性影响
  如图4可知,GPT、GOT的活性随着地塞米松浓度的升高,先增加后保持相对稳定,在浓度为0.393 0 mg/L时,试验组与空白对照组差异显著(P<0.05);地塞米松浓度达到并超过3.930 0 mg/L时,GPT、GOT的活性保持相对稳定。
  2.5 地塞米松对建鲤肝切片中游离脂肪酸(FFA)含量、脂肪酸合成酶(FAS)活性的影响
  如图5可知,试验组与空白对照组相比,当地塞米松浓度为0.393 0 mg/L时,建鲤肝切片匀浆中FFA含量和FAS的活性均出现差异显著性(P<0.05);当地塞米松浓度为3.930 0 mg/L 时差异显著(P<0.01),超过该浓度时FFA含量和FAS活性均保持相对稳定。
  2.6 地塞米松对建鲤肝切片匀浆中TC、TG含量的影响
  由图6可知,建鲤肝切片中TC、TG的含量随着地塞米松浓度的增加先增加后保持稳定,当地塞米松浓度达到0.393 0 mg/L 时,试验组与空白对照组TC、TG含量差异显著(P<0.05);浓度达到并超过3.930 0 mg/L后,TC、TG含量达到最大值且保持相对稳定。
  3 讨论
  生物体内三磷酸腺苷(ATP)作为能量转换载体,ATP含量变化直接影响器官的能量代谢[13]。因此,试验中将ATP含量作为评价器官活性的重要指标。从图1可以看出,试验组较空白对照组相比ATP含量有所降低,但差异并不显著(P>0.05)。由此可以推断,建鲤肝切片经地塞米松诱导后活性依然良好。试验组ATP降低可能是因为地塞米松上调磷酸烯醇丙酮酸羧化激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,简称PEPCK)和葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase,简称G-6-pase)的表达,促进糖异生,并降低组织细胞对葡萄糖利用效率,抑制线粒体合成ATP[14]。但从本试验的结果可以推测这种抑制作用是有限的,试验中的建鲤肝切片活性良好。
  SOD作为机体内重要的抗氧化酶[15],能有效清除机体内超氧化物自由基,有效防止自由基对机体的损害。图2显示,随着地塞米松浓度的增加,试验组中SOD的活性先逐渐降低,然后保持相对稳定,在浓度为0.393 0 mg/L时,试验组与空白对照组差异显著(P<0.05),当浓度达到并超过3.930 0 mg/L 时,SOD活性保持相对稳定。
  GPT和GOT是内源性转氨酶,因此常常通过检测细胞培养上清液中GPT和GOT活性来判断细胞受损程度[16]。本试验中GPT和GOT的活性先是随着地塞米松浓度的增加而增加,当浓度达到3.930 0 mg/L时活性达到最大且保持相对稳定。说明地塞米松对建鲤肝切片造成了一定的损伤,这种损伤可能与地塞米松促进磷脂氧化,增强脂质过氧化连锁反应,增加质膜的流动性,改变细胞膜的通透性有关。
  肝脏在蛋白质的合成与分解过程中具有重要的调节作用,动物血浆中的蛋白质几乎全部在肝脏中合成。当肝脏受到外界刺激发生损伤后,功能发生紊乱,蛋白质的合成受阻[17-18]。本试验中建鲤肝切片经地塞米松诱导12 h后,试验组与空白组相比,蛋白质含量变化明显。导致该试验结果的主要原因可能是地塞米松影响单个核糖体组装成多聚核糖体的效率,降低翻译能力,进而减弱蛋白质合成相关基因的表达而降低蛋白质的合成[19]。不仅如此,地塞米松通过激活肝细胞内溶酶体和泛素蛋白酶体蛋白水解途径促进蛋白质降解[20]。由图3可以看出,当地塞米松浓度达到3.930 0 mg/L时,蛋白质含量达到最小值,超过该浓度,蛋白质含量保持相对稳定。说明该浓度的地塞米松能有效抑制肝脏对蛋白质的合成,促进蛋白质的分解。
  肝脏不仅在蛋白质代谢过程中起重要作用,而且与脂肪代谢密切相关。已有研究证实,地塞米松可以提高肝X受体(1iver X receptors,简称LXRs)mRNA基因的表达,肝X受体合成分泌增加[21]。肝X受体上调固醇调节元件结合蛋白(sterol-regulatory element binding proteins,简称SREBPs)基因的表达,从而间接促进脂肪酸合成相关基因FAS、乙酰辅酶A羧化酶(acetyl CoA carboxylase,简称ACC)基因的表达[22]。也有研究人员发现,地塞米松能增加体外培养细胞中FAS的活性,直接促进脂肪酸合成的作用[23],在本试验中由图5-b可知,建鲤肝切片经地塞米松诱导后,FAS活性明显上升,并随着地塞米松浓度的增加而逐渐增强,在浓度为 3.930 0 mg/L 时达到最大值,之后保持相对稳定。   正常情况下,肝脏中的FFA脂化为TG,蛋白质与TG结合成脂蛋白,然后转运出肝脏参与血液循环[24];TC则一部分氧化生成胆汁进入胆囊,另一部分与蛋白质结合后以低密度蛋白和高密度蛋白的形式转运出肝脏参与血液循环[25]。本试验中,由于地塞米松对建鲤肝切片的诱导作用,FAS合成分泌增加,导致肝脏中FFA含量升高,过多的FFA对肝脏具有毒害作用,而造成“初次打击”[26];此外,FFA通过线粒体β氧化产生过氧化物ROS,再次对肝脏产生毒害作用而产生“二次打击”[27]。在地塞米松浓度达到3.930 0 mg/L后,建鲤肝切片因遭2次“打击”受损程度最为明显,试验组与空白对照组差异显著(P<0.01)。此外,肝脏中的TG含量随FFA含量增加而增加,TC含量也随肝脏中蛋白质的减少而增加。肝脏中FFA、TG、TC含量异常变化最终导致肝脏脂肪代谢异常而脂变,甚至演变成脂肪肝。
  4 结论
  通过本试验得出如下结论:地塞米松对蛋白质、脂肪代谢具有重要调节作用。用浓度为3.930 0 mg/L地塞米松诱导建鲤肝肝切片12 h能成功构建建鲤肝切片脂变模型。
  参考文献:
  [1]曹丽萍,贾 睿,杜金梁,等. 建鲤急性肝损伤模型的建立及当归提取物的保肝和抗氧化作用研究[J]. 大连海洋大学学报,2012,27(6):551-557.
  [2]杜震宇. 养殖鱼类脂肪肝成因及相關思考[J]. 水产学报,2014,38(9):1628-1638.
  [3]Ellis T,Yildiz H Y,López-Olmeda J,et al. Cortisol and finfish welfare[J]. Fish Physiology and Biochemistry,2012,38(1):163-188.
  [4]Jia Y,Yu S,Rao M S,et al. Transcription coactivator PBP/MED1 deficiency prevents dexamethasone-induced fatty liver[J]. Faseb Journal,2006,20(4):226.
  [5]Lemke U. The role of transcriptional repressor Hes-1 in glucocorticoid-mediated fatty liver development[D]. Heidelberg:University of Heidelberg,2007.
  [6]Patel R,Patel M,Tsai R,et al. LXRβ is required for glucocorticoid-induced hyperglycemia and hepatosteatosis in mice[J]. The Journal of Clinical Investigation,2011,121(1):431-441.
  [7]田颖新,王 冰,邱 红. 糖皮质激素在非酒精性脂肪肝发展中的作用[J]. 肝脏,2015,20(1):79-81.
  [8]刘小玲. 鱼类应激反应的研究[J]. 水利渔业,2007,27(3):1-3.
  [9]Mommsen T P,Vijayan M M,Moon T W. Cortisol in teleosts dynamics,mechanisms of action,and metabolic regulation[J]. Reviews in Fish Biology and Fisheries,1999,9(3):211-268.
  [10]刘英娟,杜金梁,殷国俊,等. 枸杞多糖对四氯化碳诱导建鲤原代肝细胞损伤的保护作用研究[J]. 上海海洋大学学报,2014,23(5):718-725.
  [11]卢荣华,梁旭方,孙君君,等. 草鱼肝细胞脂变模型的建立及脂代谢基因表达分析[J]. 中国水产科学,2015,22(1):24-32.
  [12]Oishia T,Teraia S,Kuwashiroa S,et al. Ezetimibe reduces fatty acid quantity in liver and decreased inflammatory cell infiltration and improved NASH in medaka model[J]. Biochemical and Biophysical Research Communications,2012,422(1):22-27.
  [13]杨吉文. 机体及细胞内ATP动态变化过程模型及其模拟试验[D]. 苏州:苏州大学,2010.
  [14]郑兴锋. 糖皮质激素对大鼠原代肝细胞糖原代谢的双向调节作用[D]. 上海:第二军医大学,2007.
  [15]Moron M S,Depierre J W,Mannervik B. Levels of glutathione,glutathione reductase and glutathione S-transferase activities in rat lung and liver[J]. Biochimica et Biophysica Acta,1979,582(1):67-78.
  [16]Visen P K S,Saraswat B,Dhawan B N. Curative effect of picroliv on primary cultured rat hepatocytes against different hepatotoxinsan:an in vitro study[J]. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods,1998,40(3):173-179.   [17]高雪岩,郑巧云,孙建宁,等. 甘草总皂苷的制备及其保肝作用的研究[J]. 中药药理与临床,2011,27(2):78-81.
  [18]董 丽,汤乃军. 四氯并二英的肝脏毒性[J]. 中华劳动卫生职业病杂志,2005,23(1):60-62.
  [19]Okamoto Y,Tanaka S,Haga Y. Enhanced GLUT2 gene expression in an oleic acid-induced in vitro fatty liver model[J]. Hepatology Research,2002,23(2):138-144.
  [20]金伟军,姚祥春,吕美巧,等. 泛素-蛋白酶体系统的结构作用和调控机制[J]. 科技通报,2008,24(1):24-29.
  [21]李 艳. 糖皮质激素和热应激对蛋鸡肝脏脂肪代谢影响[D]. 泰安:山东农业大学,2011.
  [22]Wu C H,Chen S C,Ou T T,et al. Mulberry leaf polyphenol extracts reduced hepatic lipid accumulation involving regulation of adenosine monophosphate activated protein kinase and lipogenic enzymes[J]. Journal of Functional Foods,2013,5(4):1620-1632.
  [23]徐 沖,徐国恒. 糖皮质激素与脂肪代谢和胰岛素抵抗[J]. 生理科学进展,2009,40(1):19-23.
  [24]张 情,伍佩英,曲 丹,等. 植物甾醇酯对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝的预防作用[J]. 世界华人消化杂志,2014,22(34):5242-5248.
  [25]徐存拴,张守兵,杨志利,等. 蛋白质代谢、折叠、运输、定位、装配相关基因在大鼠肝再生中表达变化[J]. 分子细胞生物学报,2008,41(2):107-119.
  [26]李 宏,张秀英,徐 尚,等. 非酒精性脂肪肝疾病与脂质变化[J]. 中国兽医杂志,2013,49(6):59-61.
  [27]董 姝,刘 平,孙明瑜. 非酒精性脂肪肝发病机制“二次打击”学说研究进展[J]. 临床肝胆病杂志,2012,28(7):551-555.代海艳,江 翱,李 伟. 黄鳝醛酮还原酶的羰基解毒作用初探[J]. 江苏农业科学,2017,45(1):150-152.
其他文献
摘要:基于新疆南疆3地州2008—2013年24个县(市)的面板数据,运用个体固定效应模型实证分析南疆普惠金融发展及各个维度对农村贫困减缓的影响。研究表明:南疆3地州普惠金融发展对农村贫困减缓具有显著的正效应,农村地区万人拥有金融机构服务人员、金融服务可得性、金融服务使用有效性对农村贫困减缓呈正效应,农村地区万人拥有金融网点数、金融服务使用度对农村贫困减缓呈负效应;从地区层面上,南疆3地州各县(市
摘要:基于遥感数据和统计数据,结合土地利用变化情况,评估2000—2017年宁夏回族自治区沙坡头国家级自然保护区生态服务价值变化情况。结果表明,2000—2017年研究区土地利用变化明显,林地,城鄉、工矿、居民用地,水域面积分别增加9 137.30、7 958.41、795.56 hm2,其他类型土地面积呈减少趋势,未利用土地变幅最大,达27.16%。研究区生态系统服务价值呈增加趋势,水域和林地面
提起笔来,就忘了一大堆想要和你们说的话,千言万语,我现在只想说:“谢谢陪我走了5年的你们,小孩、格子、武大、武小,遇见你们,此生荣幸。”  小孩儿,快乐的你  很幸运,是吧!我想到你每次总是笑得无比夸张的表情,问了自己一句,是的,真的很幸运。很幸运我们是邻居,做了6年的同班同学,一样的双鱼座。我从来没在你面前矫情,因为我知道你不会适应矫情的我,但我要矫情一下。你很好,你有很多优点,虽然难免会有一些
摘要:产业集群化的思潮推动了第六产业的形成与发展,“互联网 ”思维的兴起与运用驱动了第六产业的协同创新。运用主成分分析法与线性回归模型评价广西第六产业发展能力,找出存在的问题和主要影响因素,凭借“互联网 ”对第六产业发展的促进作用,构建基于“互联网 ”的第六产业协同创新模式,最后提出其实施策略。广西地区通过加强“互联网 ”云服务平台建设,改变农业合作组织结构,完善农产品及加工产品市场体系和终端销售
摘要:近年来,由于传统油料作物种植耕地受限,在植物营养器官内合成和储存油脂已成为新的全球研究热点。研究表明,在植物营养器官中通过基因工程手段调控参与种子中油脂合成的相关基因,会有效提升其甘油三脂含量和脂肪酸组成。LEAFY COTYLEDON 2(LEC2)是具有B3结构域的DNA结合蛋白家族的成员,参与调控胚胎发生、种子储藏蛋白合成、脂肪酸代谢等重要生物学过程。近年来,许多研究都选择该转录因子作
摘要:为了解高海拔地区党参产地土壤和党参中微量元素含量及其富集特征,对土壤和党参中微量元素含量进行测定,并分析土壤与党参中微量元素含量的相关性及党参对微量元素的富集能力。结果表明:土壤中Mn、Cu、Zn、Mo全量含量由高到低依次为Zn>Mn>Cu>Mo,土壤中Mn、Cu、Zn、Mo有效态含量由高到低依次为Mn>Zn>Cu>Mo,党参中Mn、Cu、Zn、Mo全量含量由高到低依次为Mn>Zn>Cu>M
摘要:以太行山大枣主产区为研究区域,对土壤中18种植物营养元素以及动物、人体必需元素的背景值与影响元素背景值分布的主要因素进行研究。结果表明,钙(Ca)、镁(Mg)、钠(Na)、铝(Al)、铬(Cr)、锶(Sr)、磷(P)、镍(Ni)含量相对富集,而硼(B)、钼(Mo)、氮(N)、钾(K)、铁(Fe)、铜(Cu)、锰(Mn)、锌(Zn)、硒(Se)含量相对贫乏。通过进一步研究发现,成土母质类型、土
摘要:为了制备鉴别犬瘟热病毒(CDV)流行强毒株和疫苗弱毒株的单克隆抗体,将CDV 851弱毒株浓缩后经蔗糖密度梯度离心纯化,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0瘤细胞进行细胞融合,经3~5次克隆,间接ELISA筛选,获得稳定分泌抗CDV的杂交瘤细胞2D12株。该细胞株分泌的单克隆抗体亚类为IgG1κ,与常见犬病毒不发生交叉反应。间接免疫荧光显示,单克隆抗体与CDV 851毒株发生特
摘要:互联网发展为我国农业组织化经营带来了机遇与挑战,研究互联网对于利益联结稳定性的影响和作用路径,对于激发农户参与组织化经营的积极性具有重要意义。基于江苏省农业专业合作社调研,利用计划行为、结构方程等理论方法,从农户行为角度探究互联网背景下农业组织化经营利益联结稳定性的基本内涵、影响因素及作用路径。结果表明,在互联网环境下,个体的行为态度间接对农户实际行为产生的正向影响作用最大,其次分别为主观规
摘要:以嫁接不同矮化中间砧的二年生盆栽华红苹果树为试验材料,研究不同矮化中间砧对华红苹果不同部位的矿质元素含量的影响。结果表明,不同矮化中间砧对华红苹果不同部位矿质元素含量有一定的影响,中间砧为辽砧2号的华红苹果各部位对氮、磷、钾、镁的吸收和积累能力最强,中间砧为SH38的华红苹果各部位对钙的吸收和积累能力最强;同一中间砧的华红苹果其主根、主干、新梢和叶片的矿质元素含量明显不同;各矮化中间砧之间的